| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱(chēng) | 羊外周血和臍帶血DC細(xì)胞 | |||
| 種屬來(lái)源 | 羊 | |||
| 組織來(lái)源 | 外周血和臍帶血 | |||
| 生長(zhǎng)特性 | 半懸浮生長(zhǎng) | |||
| 分離方法 | 通過(guò)密度梯度離心獲得 | |||
| 背景介紹 | 樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic cells, DC）是機(jī)體功能的專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞，它能高效地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。 DC的來(lái)源有兩條途徑：①髓樣干細(xì)胞在GM-CSF的刺激下分化為DC，稱(chēng)為髓樣DC，也稱(chēng)DCl，與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞；包括朗格漢斯細(xì)胞，間皮（或真皮）DCs以及單核細(xì)胞衍生的DCs等，②來(lái)源于淋巴樣干細(xì)胞，稱(chēng)為淋巴樣DC或漿細(xì)胞樣DC，即DC2，與T細(xì)胞和和臍帶血DC細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞。樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)表面具有豐富的抗原遞呈分子、共刺激因子和粘附因子，是功能強(qiáng)大的專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞(APC)。DC自身具有免疫刺激能力，是目前發(fā)現(xiàn)的惟一能激活未致敏的初始型T細(xì)胞的APC | |||
| 細(xì)胞鑒定 | 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90% | |||
| 支原體檢測(cè) | 羊外周血和臍帶血DC細(xì)胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌 | |||
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 培養(yǎng)基 | 羊外周血和臍帶血DC細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 第1代 | |||
| 產(chǎn)品貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運(yùn)輸方式 | T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵） | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說(shuō)明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主 | |||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨處理 | 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | |||
| 細(xì)胞復(fù)蘇 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。 | |||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | |||
| 傳代方法 | a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | |||
| 細(xì)胞凍存 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考 客戶(hù)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，有任何技術(shù)問(wèn)題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時(shí)給予解答。 | ||||
| 三、注意事項(xiàng) | ||||
| 重要提醒 | 1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。 2.在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。 3.傳代培養(yǎng)過(guò)程中，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。 4.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 | |||
| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，部分?xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 2.收到細(xì)胞未開(kāi)封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時(shí)并且未開(kāi)封，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 6.細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶(hù)操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)； 2.客戶(hù)嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
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