Real -Time PCR即實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并進(jìn)行解析的方法，它是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，并通過Real -Time PCR檢測系統(tǒng)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測，最終對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國Applied Biosystems公司推出以來，廣泛應(yīng)用于生物研究的各個(gè)領(lǐng)域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種。

PCR技術(shù)服務(wù)主要儀器及耗材：

旋渦振蕩器 ：上海青浦瀘西儀器廠產(chǎn)品

手握式電動(dòng)勻漿機(jī)：德國FLUKO公司產(chǎn)品

低溫冷凍離心機(jī)：Sigma（3K15）公司產(chǎn)品

Real-time檢測儀：ABI（ABI-7300）公司產(chǎn)品

超純水分離系統(tǒng)：美國LABCONCO公司

離心管及10μL、200μL、1000μL槍頭等常規(guī)耗材均為國產(chǎn)；RNA提取過程中所需的離心管、槍頭等耗材經(jīng)過0.1%的DEPC水浸泡過一夜，121℃滅菌30min，烘干后備用。

PCR技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室試劑的操作：

1)所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。

2)所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。

3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。

4)所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。

5)所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。

6)新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。

7)樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。

本程序適用于自動(dòng)PCR操作，可適用于大多數(shù)情況，所用酶是不含核酸外切酶活性的熱穩(wěn)定聚合酶，如Taq聚合酶等。
引物（各50pmol） 0.2mmol/L dNTPs（必須使用高質(zhì)量的dNTPs，這一點(diǎn)非常重要。dNTPs經(jīng)反復(fù)化凍后會(huì)發(fā)生降解，因此應(yīng)分成小份保存。應(yīng)注意混合物中四種dNTP的量要相等。

所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于食用，醫(yī)療等其它用途。