藥典培養(yǎng)基質(zhì)量控制測試安全操作

    生長培養(yǎng)基可以在實驗室中由單獨的成分來制備，很多實驗室因為他們的使用情況，使用脫水培養(yǎng)基或購買商業(yè)化的制備好的裝在平皿或玻璃容器中的培養(yǎng)基。生產(chǎn)者企圖標(biāo)準(zhǔn)化制備來源于生物的培養(yǎng)基的原料，但是必須經(jīng)常不可避免的處理這些從生物來源得到的原料的不同，因而批與批之間的不同必須考慮。實驗室制備的或是供應(yīng)商提供的培養(yǎng)基的性能更多的是依靠其制備過程。不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基的制備對微生物的生長、復(fù)壯能引起令人不滿意的結(jié)果并導(dǎo)致可疑結(jié)果。

應(yīng)對所有的制備培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制測試。工廠內(nèi)制備的培養(yǎng)基的常規(guī)質(zhì)量測試包括pH、促生長試驗和為確定有效期的定期的穩(wěn)定性測試。

當(dāng)工廠內(nèi)制備的微生物培養(yǎng)基是采用適當(dāng)?shù)闹苽浜鸵羊炞C過滅菌方法，促生長試驗可以于購入的脫水培養(yǎng)基，除非相關(guān)藥典方法另有說明。如果培養(yǎng)基的制備沒有經(jīng)過驗證，每一批的培養(yǎng)基都要進(jìn)行促生長試驗。測試的微生物應(yīng)根據(jù)合適的藥典方法選擇，或基于供應(yīng)商的對特殊的培養(yǎng)基的提議，或基于典型的環(huán)境中微生物。

培養(yǎng)基的有效期能支持促生長試驗顯示其性能，滿足可接受的標(biāo)準(zhǔn)至到或包括有效期。每一批培養(yǎng)基的貨架壽命將依據(jù)規(guī)定條件組分和配方的穩(wěn)定性和容器和密封件的型號。

當(dāng)一批培養(yǎng)基不能滿足促生長試驗的要求時，應(yīng)該啟動調(diào)查，找到原因。調(diào)查應(yīng)包括糾正措施來防止問題的再發(fā)生。如果未找到可指認(rèn)的原因或關(guān)于不生長糾正決定是不確定的，則問題批不能使用。

用于診斷目的的試劑，如支持微生物鑒定用的革蘭氏染色和氧化酶測試。其擁有的特性與微生物的培養(yǎng)基在質(zhì)量控制測試中是相似的。根據(jù)供應(yīng)商的說明，選擇正確的質(zhì)量控制用標(biāo)準(zhǔn)微生物進(jìn)行測試優(yōu)先于未知樣品的診斷測試。

在環(huán)境監(jiān)測中用到的培養(yǎng)基應(yīng)特別小心。用于關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測的培養(yǎng)基更適合雙層打包，并zui終滅菌。如果關(guān)鍵區(qū)域用培養(yǎng)基沒有zui終滅菌，應(yīng)進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，并在使用前進(jìn)行100％檢查。防止帶入的外來的污染，并防止假陽性。用于表面接觸皿的表面凸起培養(yǎng)基應(yīng)被驗證。培養(yǎng)箱，霉菌培養(yǎng)箱

微生物菌種的維護(hù)

生物樣本是zui靈敏（delicate）的,因為他們生存能力和特性是依賴于適當(dāng)?shù)奶幚砗唾A存。菌種的處理和貯存的標(biāo)準(zhǔn)是使用者的實驗室制定的，采用減少污染的機(jī)會和減少生長特性變更。小心一致的處理貯存用菌種是微生物測試結(jié)果一致性的重要因素。按藥典方法方法使用的菌種應(yīng)該取自國家菌種保藏中心?？梢园ɡ鋬龅?、凍干的、斜面培養(yǎng)的或是馬上使用的形式。在質(zhì)量控制測試使用前應(yīng)進(jìn)行菌種純度的確定和菌種的鑒別。馬上使用的菌種要求確定純度、鑒別、接種體大小。鑒定的確認(rèn)，對通常用的實驗室菌種，理想的是進(jìn)行基因水平的分析（如：使用合適的經(jīng)過驗證的探針進(jìn)行DNA指紋,RNA基因排序,PCR光電導(dǎo)繼電器）

菌種的制備和復(fù)壯應(yīng)該參照供應(yīng)商的說明書或采用己驗證批準(zhǔn)的方法。種子批技術(shù)被推薦用于貯備用菌種的保存。

從國家菌種保藏中心得到的初始菌種在合適的培養(yǎng)基被復(fù)壯、培養(yǎng)。部分的貯備菌種（*次接種或是傳代）是懸浮在抗冷凍培養(yǎng)基中，分裝至小瓶中，在零下30°或更低的溫度下冷凍，直到使用。如果冷凍在零下70°，或是凍干形式，菌種可以持續(xù)的保存。這些冷凍的貯存菌種可以每月或每周接種用作工作菌種。一旦打開，制備了工作懸浮液，不能再冷凍。不能用的部分應(yīng)該丟棄，以減少繁殖能力損失帶來的風(fēng)險和貯存污染帶來的風(fēng)險。

工作用菌種的接種量應(yīng)該記錄，以防止過量接種增加表型變種。一代的定義是從具有繁殖能力的菌種接種微生物到一新鮮制備的具有促微生物生長能力　和培養(yǎng)基中。任何形式的接種都被當(dāng)做是一次轉(zhuǎn)移傳代。

實驗室儀器的維護(hù)

多數(shù)的儀器（培養(yǎng)箱、水浴、滅菌鍋）必須遵從標(biāo)準(zhǔn)驗證程序包括安裝確認(rèn)、操作確認(rèn)和性能確認(rèn)。另外還要求有定期的校驗（通常每年一次）。新的設(shè)備，實驗室關(guān)鍵的，應(yīng)該根據(jù)QCU 批準(zhǔn)的方案進(jìn)行確認(rèn)。

用于微生物實驗室儀器（如：pH計和分光光度計）應(yīng)按規(guī)定的進(jìn)度表進(jìn)行定期的校驗和測試，以保證其性能。校驗的頻率和性能的確認(rèn)是基于儀器的型號的不同和能產(chǎn)生實驗室數(shù)據(jù)的設(shè)備的重要程度的不同。

實驗室的布局和操作

實驗室的布局和設(shè)計應(yīng)考慮良好的微生物操作和安全。本質(zhì)是zui大程度的減少微生物菌種的交叉污染，微生物樣本的處理環(huán)境也是重要，因為環(huán)境也能引起也污染的可能。

一般情況下，實驗室應(yīng)分成潔凈區(qū)、無菌區(qū)和陽性室。如果可能，處理和培養(yǎng)滅菌產(chǎn)品的周圍的環(huán)境區(qū)域應(yīng)與陽性區(qū)*分離。但是要將陽性和潔凈區(qū)*分開是不可能的，那么有必要采取隔離和無菌操作來減少可能的意外污染。這些隔離包括：防護(hù)衣、清潔、消毒程序和僅用于潔凈無菌的生物安全柜。對于活的菌種引起的溢出和災(zāi)禍的程序應(yīng)放在現(xiàn)場，所有相關(guān)技術(shù)人員進(jìn)行上述方法的培訓(xùn)。

部分樣品會出現(xiàn)微生物的生長，要求進(jìn)一步分析來確定污染源。當(dāng)發(fā)現(xiàn)有菌生長，樣品應(yīng)從潔凈區(qū)立即轉(zhuǎn)入陽性區(qū)。接種，著色、菌種鑒定或其它的調(diào)查操作應(yīng)在實驗室的陽性室操作。如果可能，發(fā)現(xiàn)有菌落生長的樣品在實驗室的潔凈區(qū)是不能被打開的。小心隔離污染的樣品和原料將減少假陽性結(jié)果。

正在進(jìn)行取樣操作活動的人員不能進(jìn)入陽性室或在陽性室操作處理除非特別小心，包括穿防護(hù)服和手套，退出后仔細(xì)清凈手。理想狀態(tài)，受權(quán)人員進(jìn)行樣品取樣操作時，特別是無菌過程的，不能在陽性操作室附近工作。同樣，所有微生物樣品都應(yīng)采用無菌取樣技術(shù)，包括非無菌樣品的取樣。如果可能，在規(guī)定的*無菌的條件的取樣區(qū)域進(jìn)行操作。

要重點考慮的是樣品的污染，它能導(dǎo)致假陽性的出現(xiàn)，除非在過程中特別注意無菌操作。取樣間應(yīng)設(shè)計好，這要原料和輔料的取樣就可以在受控條件下進(jìn)行，包括無菌衣和無菌取樣設(shè)備。對于公用系統(tǒng)的取樣，如水系統(tǒng)，在*無菌的條件下是不太可能的；然而，當(dāng)樣品未采用無菌技術(shù)取樣時應(yīng)有記錄，其可靠性不可避免的下降。

環(huán)境監(jiān)測的取樣方法要求對取樣的設(shè)備（負(fù)載或未負(fù)載）進(jìn)行zui小化的無菌處理。如果可能，在對取樣環(huán)境進(jìn)行取樣時，取樣的設(shè)備應(yīng)同時配備培養(yǎng)基，。

實驗室中所有的測試，對關(guān)鍵的測試操作，如：zui終劑型的無菌測試，散裝產(chǎn)品，生物產(chǎn)品用菌種培養(yǎng)，或是生物產(chǎn)品用細(xì)胞培養(yǎng)都應(yīng)在受控的條件下進(jìn)行，隔離技術(shù)也是可以采用的，無菌的微生物測試。己在顯示，隔離技術(shù)比人為的潔凈區(qū)域具有更低的環(huán)境污染水平，因此，更能減少假陽性結(jié)果的產(chǎn)生。隔離系統(tǒng)的驗證是重要的，既能保證環(huán)境的完整又能防止假陰性結(jié)果的產(chǎn)生，假陰性的結(jié)果是由化學(xué)消毒物質(zhì)帶入。

人員的培訓(xùn)

從事藥品生產(chǎn)所有階段的每一個人員應(yīng)進(jìn)行教育，培訓(xùn)，工作經(jīng)驗。微生物測試的要求，對人員，主管，的核心教育背景應(yīng)是微生物專業(yè)或是與生物學(xué)相關(guān)的專業(yè)。同時有職責(zé)保持技能和經(jīng)驗水平。

操作程序的連貫性在微生物實驗室中是必要。這些程序在培訓(xùn)程序中提供了二個目地。*，這些SOPS描述了一種方法論，微生物學(xué)家按照這些SOPS能得到準(zhǔn)確的和可重復(fù)的結(jié)果，同時也能得到培訓(xùn)的基礎(chǔ)。第二，通過跟蹤這些程序，微生物專家能證明其熟練程度，程序的編號或是標(biāo)題也能提供鑒別，微生物學(xué)家獲得的與其工作職責(zé)相關(guān)的專門培訓(xùn)。

應(yīng)對每個人員建立與其工作職責(zé)相關(guān)的培訓(xùn)課程。在具有微生物測試資質(zhì)之前，不能獨立進(jìn)行相關(guān)操作。培訓(xùn)記錄應(yīng)當(dāng)場記錄，在專門的SOP版本中，應(yīng)有微生物學(xué)家的培訓(xùn)證明。

階段的性能評估在數(shù)據(jù)記錄中是比較明智的。這些性能測試證明了在微生物實驗室操作的資質(zhì)，如衛(wèi)生，鋪平皿，無菌技術(shù)，文檔和其它微生物學(xué)家提意的。

微生物學(xué)家具有監(jiān)管和管理的職責(zé)，應(yīng)具備適當(dāng)?shù)慕逃龔S內(nèi)監(jiān)管技能的培訓(xùn)，實驗室安全，進(jìn)程，實驗室調(diào)查，寫技術(shù)報告，相關(guān)SOP，和其它與公司流程相關(guān)的關(guān)鍵方面如實驗室管理職能中提到的。

記錄

記錄應(yīng)能充分證明測試是在實驗室中通過受控的方法完成的。這包括，但不于以下：

微生物培訓(xùn)和熟練程度的確認(rèn)；

設(shè)備的驗證，校驗和維護(hù)；

測試中的性能（如24小時至7天的流程記錄）；

培養(yǎng)基的制備，無菌檢查，促生長試驗和選擇能力；

培養(yǎng)基的目錄和控制測試；

關(guān)鍵組分的測試應(yīng)按規(guī)定的程序執(zhí)行；

數(shù)據(jù)和計算的復(fù)核；

報告的復(fù)核由QCU或有責(zé)任的）；

偏差的調(diào)查；

實驗室記錄的維護(hù)

　　合適的數(shù)據(jù)記錄和研究對成功的微生物實驗室是重要的。zui重要的原則是按照SOP規(guī)定操作，SOP應(yīng)是書面化的，并能反映測試的實際操作是如何進(jìn)行的，實驗室筆記本應(yīng)能提供所有詳細(xì)的記錄，并保證記錄的完整。實驗室書寫至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：

日期；

測試物料

微生物測試人員名稱

操作程序的號碼

記錄測試的結(jié)果

偏差

參數(shù)的記錄（使用的設(shè)備，使用微生物菌種，培養(yǎng)基的批號）

管理員，第二個復(fù)核人簽名

每一臺關(guān)鍵儀器的使用都應(yīng)在臺帳上記錄，所有都應(yīng)根據(jù)SOP的要求記錄在校正進(jìn)度表和維護(hù)記錄上。日志和其它記錄形式對實驗室記錄本起到支持和幫助。設(shè)備的溫度（水浴，培養(yǎng)箱，滅菌鍋）應(yīng)有記錄并可以追蹤。

己簽發(fā)的SOP及其版本應(yīng)有清楚的記錄。數(shù)據(jù)的改變應(yīng)用單錢劃去并簽上日期和縮寫。初始的數(shù)據(jù)不應(yīng)抹去或復(fù)蓋。

測試結(jié)果應(yīng)包括初始記數(shù)，允許復(fù)核者根據(jù)zui終結(jié)果重新計算。數(shù)據(jù)的分析方法在SOP中應(yīng)詳細(xì)描述。

所有的實驗室記錄應(yīng)存檔避免遺失，現(xiàn)場中應(yīng)有正式的記錄保存和查閱程序。

檢驗結(jié)果的解釋

微生物試驗結(jié)果難以解釋，因為下列原因：

微生物是普遍存在于自然界中的，又存在于通常的環(huán)境污染，由人類支配的很多類型的特殊的有機(jī)物。

實驗室分析人員在樣品分析和操作中可能引入微生物污染。

微生物可能不是均勻的分布在樣品和環(huán)境中。

微生物的分析結(jié)果存在相當(dāng)大的可變性。

因此，從預(yù)期結(jié)果中獲得的微小的不同是沒有多大意義的。

因為微生物分析的這些特性，實驗分析應(yīng)非常小心以避免外來的污染，正如本章前面討論的。同樣重要的，從主要微生物觀察考慮，結(jié)果必須要解釋。不僅包括假定污染的種類，而且包括藥物成分、輔料或測試環(huán)境中存在的有機(jī)物。另外，其微生物的生長特性也應(yīng)該考慮。上海島韓實業(yè)有限公司

當(dāng)出現(xiàn)的結(jié)果與藥典正文或其它建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不一致時，就應(yīng)該進(jìn)行調(diào)查。沒有滿足標(biāo)準(zhǔn)要求的微生物污染，通常有兩個明顯的原因：可能是實驗室的錯誤或是實驗環(huán)境產(chǎn)生無效的結(jié)果，也可能是產(chǎn)品有一定污染或其它形式的污染使得超出規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)或限度。另外一種情況，實驗室操作，在多數(shù)情況下，應(yīng)立即通報。

應(yīng)該對圍繞結(jié)果的所有情況進(jìn)行全面的評估。所有實驗條件和因應(yīng)充分考慮，包括數(shù)據(jù)的漂移，與建立的限度和標(biāo)準(zhǔn)比較。重要的是根據(jù)結(jié)果的可變性知道觀察的統(tǒng)計意義。

實驗室環(huán)境，對現(xiàn)場取樣的保護(hù)裝置，測試條件下物料的歷史數(shù)據(jù)，物料的種類，特別注意物料中微生物的存活和繁殖在調(diào)查中應(yīng)被考慮。另外，與實驗員進(jìn)行討論，分析中的實際操作可以得到有價值的信息。來決定結(jié)果的可靠性和決定采取和措施。如果可以確定得到不一致結(jié)果的明確原因，那么應(yīng)該采取糾正措施，并記錄問題所在。跟蹤正式批準(zhǔn)和執(zhí)行的糾正措施，并進(jìn)行仔細(xì)的檢查。

如果分析結(jié)果是無效的，基于一個可指出的錯誤，必須記錄。實驗室應(yīng)該有證實測試（再測試）的SOP規(guī)定，如果必要，再取樣。關(guān)于再取樣，法規(guī)和藥典沒有給出分析結(jié)果調(diào)查的操作