標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.296-2023的前身是GB 5009.82-2016,現(xiàn)在食品中維生素A、E繼續(xù)使用標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.82-2016，維生素D單獨(dú)實(shí)行標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.296-2023。本文將重點(diǎn)介紹GB 5009.296-2023標(biāo)準(zhǔn)中3個(gè)方法實(shí)驗(yàn)中的注意要點(diǎn)，與大家分享與交流。

        在方法解讀之前，可以先了解下維生素D來(lái)源和性質(zhì)，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中才能更好的提取目標(biāo)物。

一、維生素D的來(lái)源：

二、維生素A、D、E性質(zhì)

三、第一法 正相色譜凈化-反相液相色譜法的注意要點(diǎn)

1、取樣量嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)的不同基質(zhì)的取樣量，因?yàn)楦煞üに嚕恿可贂?huì)影響均勻性。

2、上機(jī)前，為了保護(hù)正向硅膠柱，提取液水洗后，必須用無(wú)水硫酸鎂鈉粉末脫水至無(wú)水狀態(tài)。

3、為保證儀器靈敏度，正向色譜進(jìn)樣量：500μL；反相色譜進(jìn)樣量：100μL;

4、濃縮時(shí)，大體積石油醚待濃縮液，可選用萊奧12位全自動(dòng)氮吹濃縮儀，可支持自動(dòng)定容到1ml，再氮吹到近干；大體積氮吹時(shí)，實(shí)驗(yàn)員可解放雙手，無(wú)需值守，并且確保氮吹不會(huì)吹到干。防止維生素D附著壁上，影響回收率。

Leowlab SmartVap N12

萊奧12位全自動(dòng)定量濃縮儀

5、內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法的選擇？首先確定樣品是否含有維生素D2和D3.

四、第二法 在線(xiàn)柱切換-反相液相色譜法的注意要點(diǎn)

1、關(guān)注儀器靈敏度問(wèn)題，根據(jù)取樣量、定容體積、進(jìn)樣量、檢測(cè)器靈敏度、檢出限綜合考慮。

2、固相萃取柱填料可選HLB，重點(diǎn)要保證較大的柱容量，耐堿性、耐壓性，由于樣液皂化條件是堿性的，待凈化液屬于堿性。

3、標(biāo)準(zhǔn)提到的奶粉、油脂含量高的肉類(lèi)、粘稠的蜂蠟等制品屬于復(fù)雜類(lèi)基質(zhì)，需要過(guò)柱壓力較大，選用萊奧48位正壓固相萃取儀，針對(duì)以上復(fù)雜基質(zhì)，壓力相比真空泵負(fù)壓裝置，最高可達(dá)100psi，可以輕松快速過(guò)柱。

4、固相萃取可選擇萊奧48位正壓固相萃取儀，可取代實(shí)驗(yàn)室常用的真空泵負(fù)壓萃取裝置，能大大縮短萃取時(shí)間，提高萃取效率，達(dá)到很好的平行性及回收率。

Leowlab Purifier A48

萊奧48位正壓固相萃取儀

5、固相萃取儀后的液體，加入適量水，主要是克服色譜溶劑效應(yīng)，改善峰型；

6、一維色譜柱可選用 PFP(五氟苯基)填料，在同時(shí)分離生育酚異構(gòu)體時(shí)使用。

7、二維色譜柱可選PAH(多環(huán)芳烴)或固醇類(lèi)分析C18柱。

8、捕集取柱可選C18或C8，粒徑可采用10μm填料，柱長(zhǎng)可選用到30mm

五、第三法 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的注意要點(diǎn)

1、選擇硅膠基質(zhì)的固相萃取柱，需要注意防水，活化則選擇有機(jī)溶劑進(jìn)行活化。

2、同位素內(nèi)標(biāo)的選擇:維生素 D2-d3、和維生素 D3-d3;，也可使用維生素D2-d6。和維生素 D3;-d6?？删C合考慮成本;

3.質(zhì)譜檢測(cè)的離子化效率的評(píng)估實(shí)驗(yàn)必須開(kāi)展，對(duì)于不同的基質(zhì)，樣品是不一樣的。

4.質(zhì)控樣品的跟進(jìn)是必要的，才能驗(yàn)證做的樣本結(jié)果的準(zhǔn)確性。

5、標(biāo)準(zhǔn)提到的奶粉、油脂含量高的肉類(lèi)、粘稠的蜂蠟等制品屬于復(fù)雜類(lèi)基質(zhì)，需要過(guò)柱壓力較大，選用萊奧48位正壓固相萃取儀，針對(duì)以上復(fù)雜基質(zhì)，壓力相比真空泵負(fù)壓裝置，最高可達(dá)100psi，可以輕松快速過(guò)柱。

Leowlab Purifier A48

萊奧48位正壓固相萃取儀

六、關(guān)于我們

氮?dú)獍l(fā)生器

正壓固相萃取儀&氮吹儀

廣州萊奧實(shí)驗(yàn)室科技有限公司總部位于廣州,是一家專(zhuān)注于有機(jī)質(zhì)譜供氣及前處理儀器的高科技企業(yè)。

團(tuán)隊(duì)人員擁有十幾年的質(zhì)譜儀、前處理儀器、氮?dú)獍l(fā)生器從業(yè)經(jīng)歷。公司服務(wù)于全國(guó)食品、制藥、臨床檢驗(yàn)、環(huán)境、司法鑒定、科研院所等行業(yè)。