當(dāng)手性色譜柱分離度下降、
柱壓過高等色譜柱異?,F(xiàn)象發(fā)生時(shí),
才需要使用本方法沖洗
1、一般情況下,使用常規(guī)方法沖洗色譜柱;若常規(guī)方法無效,則使用特殊方法一沖洗色譜柱;若特殊方法一無效,則使用特殊方法二沖洗色譜柱。
2、沖洗過程中,10µm柱柱壓請(qǐng)勿超過3Mpa,5µm柱柱壓請(qǐng)勿超過6Mpa,3µm柱柱壓請(qǐng)勿超過15Mpa。
3、以下沖洗過程中涉及的流速僅供參考,實(shí)際操作中以柱壓不超過以上說明為宜。
4、以下沖洗過程中提到的20倍柱體積,以4.6*150mm規(guī)格柱為例,約為30mL。
常規(guī)方法:
1、用水/甲醇或水/乙腈(80/20,v/v或85/15,v/v),流速0.5ml/min,沖洗20倍柱體積;
2、沖洗結(jié)束,驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否柱效有提高。
特殊方法一:
1、 用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,沖洗20倍柱體積;
2、逐漸提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積;
3、逐漸增加水的比例至90%,即水/甲醇(90/10,v/v);
4、沖洗結(jié)束,驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否柱效有提高。
特殊方法二:
1、用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,沖洗20倍柱體積;
2、逐漸提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積;
3、再用酸性流動(dòng)相,甲醇/三氟·乙酸(100/0.1,v/v),0.3ml/min的流速,沖洗20倍柱體積;
4、再用中性流動(dòng)相甲醇過渡,甲醇100%,0.3ml/min的流速,沖洗20倍柱體積;
5、逐漸增加水的比例到90%,即水/甲醇(90/10,v/v);
6、沖洗結(jié)束,驗(yàn)柱或重復(fù)之前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否有提高柱效。
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