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1.消毒物品的初步處理，凡接觸過病原微生物的醫(yī)療器械、被單、衣物等均應(yīng)先用化學消毒劑進行消毒。常規(guī)清洗時，先用洗滌劑溶液浸泡擦洗，去除物品上的油污、血垢等污物，然后用流水沖凈。有軸節(jié)、齒槽和縫隙的器械和其它物品，應(yīng)盡可能張開或拆卸，進行洗刷。洗滌后的物品應(yīng)擦干，按臨床需要分類包裝，以免再污染。清除污染前后物品的容器和運送工具應(yīng)嚴格區(qū)分，以防交叉感染。
3.消毒物品裝放應(yīng)合理，盡量將同類物品裝在同一鍋內(nèi)滅菌。物品裝放時，上下左右均應(yīng)交叉錯開，留出縫隙，使蒸汽容易穿透。大消毒包應(yīng)立著放上層，小包放下層，布類和金屬類物品同時滅菌時，應(yīng)將金屬類物品包放在下層，使兩者受熱基本一致，并防止金屬物品滅菌中產(chǎn)生的冷凝水弄濕包布。
4.排盡空氣，使用高壓蒸汽滅菌器時，最關(guān)鍵的是將鍋內(nèi)空氣排盡。關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達到0.1MPa時，開始計時，維持壓力到指ding的時間。
5.合理計算滅菌時間，穿透時間，從鍋內(nèi)達到滅菌溫度開始到鍋內(nèi)最難達到的部位也達到此溫度所需要的時間；維持時間，即殺滅微生物所需要的時間，一般以殺滅嗜熱脂肪桿菌芽胞所需時間來表示；安全時間，為使滅菌得到確切保證所需要增加的時間，一般為熱死亡時間的一半，其長短視消毒物品而定。
6.開蓋操作，達到滅菌時間后即可切斷電源，在壓力降到0.05MPa，可緩慢放出蒸氣，注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當壓力降到零后才能開蓋，取出培養(yǎng)基擺在平臺上以待冷凝，不可久不放氣，否則容易引起培養(yǎng)基成分變化以至無法制作斜面培養(yǎng)基。
7.滅菌后操作，要求消毒物品干燥后檢查指示劑，當達到滅菌要求時可出鍋。取無菌物品時，要嚴格無菌操作，開蓋物品先將蓋蓋好，貯槽關(guān)閉好通氣孔。同時應(yīng)分類放置，順序發(fā)放取用。
8.防止超熱蒸汽，超熱蒸汽溫度雖高，但像空氣一樣，遇到消毒物品時不能凝成水，不能釋放潛熱，所以對滅菌不利。防止超熱的辦法是使用外源蒸汽滅菌器時，不要使夾層的溫度高于消毒室的溫度，兩者應(yīng)相近不要使壓力過高的蒸汽進入消毒室內(nèi)；滅菌時不要先用壓力高的蒸汽加熱到要求溫度，然后再降至正常壓力。
9.高壓滅菌后不變質(zhì)的物品，如無菌水、栽培介質(zhì)、接種用具，可以延長滅菌時間或提高壓力。而培養(yǎng)基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，不能隨意延長時間。
10.含有鹽分的液體漏出或溢出時，一定要及時擦干凈，沿著蓋子的密封圈要擦干，否則會腐蝕容器和管道。
11.不要在爆炸性氣體附近使用儀器。
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