美國(guó)華盛頓大學(xué)團(tuán)隊(duì)使用eDNA及PCR技術(shù)尋找保護(hù)動(dòng)物斑鱉
稀有物種保護(hù):
通過水體中的環(huán)境DNA可以有效檢測(cè)水生脊椎動(dòng)物,并且已在濕地和大型河流研究中得到證實(shí)[26]。利用環(huán)境DNA檢測(cè)河流中的稀有物種和隱秘物種可以增加調(diào)查結(jié)果準(zhǔn)確性,減少調(diào)查成本。Goldberg等[8]利用metabarcoding技術(shù),通過收集快速流動(dòng)的水體環(huán)境DNA樣本,對(duì)尾突角蟾(Ascaphus montanus)和愛達(dá)荷陸巨螈(Dicamptodon aterrimus)兩種物種進(jìn)行監(jiān)測(cè)。設(shè)計(jì)特異性引物尾突角蟾和愛達(dá)荷陸巨螈的線粒體Cyt b區(qū)域的85bp和78bp片段,在5個(gè)不同物種密度的水樣中均成功進(jìn)行了PCR擴(kuò)增并靈敏地檢測(cè)到了目標(biāo)物種的存在。該研究還發(fā)現(xiàn)早春季節(jié)比早秋季節(jié)更難以檢測(cè)到兩棲類物種存在,推測(cè)可能是由于早春比早秋溫度更低,降低了生物代謝速率而導(dǎo)致。Foote等[28]從海水中分離DNA,使用特異性引物擴(kuò)增線粒體DNA區(qū)域60—80bp的片段檢測(cè)水體中是否存在港灣鼠海豚(Phocoena phocoena),對(duì)控制條件下和自然條件下該物種進(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)。在一個(gè)樣地中檢測(cè)到長(zhǎng)肢領(lǐng)航鯨(Globicephala melas),而該物種極少在研究海域被發(fā)現(xiàn),結(jié)果表明環(huán)境DNA的方法可用于檢測(cè)稀有物種。Wilcox等[27]利用環(huán)境DNA結(jié)合定量PCR檢測(cè)了河流中的兩個(gè)稀有物種,美洲紅點(diǎn)鮭(Salvelinus fontinalis)和強(qiáng)壯紅點(diǎn)鮭(S.confluentus),同時(shí)發(fā)現(xiàn)定量PCR(qPCR)比傳統(tǒng)PCR更加靈敏,檢測(cè)概率更高。Rees等[25]利用環(huán)境DNA和傳統(tǒng)的實(shí)地調(diào)查方法開展對(duì)英國(guó)保護(hù)物種冠北螈(Triturus cristatus)的監(jiān)測(cè),野外調(diào)查發(fā)現(xiàn)有冠北螈分布的地點(diǎn)中,采集的水樣DNA中成功檢測(cè)出冠北螈的概率為84%。使用環(huán)境DNA方法監(jiān)測(cè)物種,對(duì)物種及其生存環(huán)境不會(huì)造成損害。隨著測(cè)序成本的下降,環(huán)境DNA與metabarcoding技術(shù)結(jié)合應(yīng)用在許多情況下甚至優(yōu)于一些傳統(tǒng)監(jiān)測(cè)方法,成為物種監(jiān)測(cè)方法的又一選擇[4]。
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