RIPA裂解液（強）說明書

RIPA Lysis Buffer

目錄號：K2333

保存條件：4℃保存。

組分說明

                            Cat. No.         K2333

                             Volume        100 ml

 本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途產品簡介

　　RIPA裂解液是一種傳統的組織以及細胞快速裂解液，主要用于從動物組織和哺乳

動物細胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解貼壁細胞和懸浮細胞。按照其裂解液的強度

可以分為強、中、弱三類，具體特點和差異請參考附表2，可根據實驗需求選擇相應產

品。RIPA裂解液（強）可以有效提取細胞核、細胞膜和胞漿蛋白，提取的蛋白可應用

于蛋白定量、Western Blot、IP等檢測分析。

　　RIPA裂解液（強）的主要成分為50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1%Triton

X-100，1%  sodium  deoxycholate，0.1%  SDS以及sodium  orthovanadate，sodium

fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可有效抑制蛋白降解。

注意事項

1．為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進行。

2．使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品，可采用BCA法進行蛋白定量，以測定蛋白濃度。

   產品可單獨向本公司訂購，如：K0014  BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的

   去垢劑，不能用Bradford法進行蛋白定量。

3．建議在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，以防止蛋

   白降解，或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產品可單獨向本公司訂購，如：K2200 蛋白酶抑制劑混合物，K2383 磷酸酶抑制劑混合物。

4．若需獲得更高濃度的蛋白，應減少哺乳動物蛋白抽提試劑的使用量。

5．對于培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞，推薦先使用常規(guī)方法消化細胞，再參考懸浮細胞蛋白提

   取步驟操作。

6．對于離心獲得的細胞，若不確定細胞體積，可根據細胞數量計算RIPA裂解液的使用

   量。如5×10⁶個Hela細胞約需加入500 μl RIPA裂解液，以此類推。

操作步驟

  I  細胞樣品

 · 貼壁細胞蛋白抽提

1．小心傾去貼壁細胞的培養(yǎng)液。

2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質，請先使用預冷的

   PBS漂洗細胞。

3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑），試劑使用量請參考

   附表1，在冰上用槍頭吹打貼壁細胞。

表 1   貼壁細胞RIPA 裂解液使用量推薦表

細胞培養(yǎng)板類型或培養(yǎng)面積                         RIPA  裂解液使用量

                     100 mm*                         500-1,000 µl

                      60 mm                          250-500 µl

                    6 孔培養(yǎng)板                          200-400 µl /孔

                   24 孔培養(yǎng)板                          100-200 µl /孔

                   96 孔培養(yǎng)板                          50-100 µl /孔

 * 對于100 mm培養(yǎng)板培養(yǎng)的107個細胞 (50 mg)可裂解獲得約3 mg總蛋白（細胞類型不同略有差異）。

4．將裂解液轉移至新的離心管中，冰上孵育20分鐘，使細胞充分裂解。

5．14,000×g離心10分鐘。轉移上清液至新管中，進行下一步分析。

 · 懸浮細胞蛋白提取

1．懸浮細胞2,500×g，離心5分鐘，棄去上清。

2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質，請使用PBS漂洗

   細胞。漂洗后的細胞懸浮液2,500×g離心5分鐘，棄去上清。

3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑），每5×106細胞加入約

   200-500 µl RIPA裂解液，吹打均勻。

4．冰上放置20分鐘，使細胞充分裂解。

5．14,000×g離心10分鐘。轉移上清液至新管中，進行下一步分析。

  II  組織樣品

1．取適當的RIPA裂解液，在使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑。

2．稱量實驗組織的重量，按照1：10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后將組織剪成細

   小碎片，用電動勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物，可適當減少組織蛋白

   抽提試劑使用量。

3．冰上孵育20分鐘，使細胞充分裂解。

4．14,000×g 離心10分鐘。轉移上清液至新管中，進行下一步分析。

  注：RIPA裂解液的裂解產物中可能會出現一小團透明膠狀物，屬正?，F象。該透明膠狀物為基因組。

 相關產品信息

            目錄號                 產品名稱

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            K0199B             Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒

            K2200              蛋白酶抑制劑混合物

            K2383              蛋白磷酸酶抑制劑混合物

            K0014              BCA蛋白定量試劑盒

            K0022              SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

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