磁珠分選細(xì)胞實驗步驟

磁珠分選是一種常用的細(xì)胞分離技術(shù)，特別適用于免疫細(xì)胞的純化。

以下是基于最新信息的磁珠分選細(xì)胞實驗步驟：

1.樣本準(zhǔn)備：

  1.1使用抗凝劑處理外周血液樣本，并通過密度梯度離心法分離出PBMC（外周血單個核細(xì)胞）。

  1.2如果處理組織樣本，需要將組織切碎并消化以制備單細(xì)胞懸浮液。

2.磁珠標(biāo)記：

  2.1計算細(xì)胞數(shù)量，并根據(jù)需要添加適量的磁珠。例如，對于每1億細(xì)胞，可能需要添加一定體積的磁珠。

  2.2將磁珠與細(xì)胞懸液混合，輕輕混勻后在冰上孵育，以促進(jìn)磁珠與目標(biāo)細(xì)胞表面標(biāo)志物的結(jié)合。

3.磁性分選：

  3.1將磁珠標(biāo)記的細(xì)胞懸液通過帶有磁性的分選柱。磁珠與細(xì)胞結(jié)合后會被吸附在分選柱中，而未標(biāo)記的細(xì)胞則隨緩沖液流出。

  3.2洗滌分選柱以去除未結(jié)合的磁珠和雜質(zhì)。

  3.3使用適當(dāng)?shù)木彌_液將吸附在分選柱上的目標(biāo)細(xì)胞洗脫，收集洗脫液中的細(xì)胞。

4.細(xì)胞收集與鑒定：

  4.1收集洗脫的細(xì)胞，并進(jìn)行必要的洗滌步驟以去除殘留的磁珠。

  4.2使用流式細(xì)胞術(shù)或其他細(xì)胞鑒定方法檢查細(xì)胞的純度和活性。

5.實驗注意事項：

  5.1在整個實驗過程中，應(yīng)保持細(xì)胞的低溫處理，以維持細(xì)胞活性。

  5.2操作時應(yīng)輕柔，避免對細(xì)胞造成機(jī)械性損傷。

  5.3確保使用的磁珠和抗體特異性高，以提高分選效率和純度。