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子宮內膜異位癥模型實驗介紹:
常用動物:大鼠,小鼠,性成熟,8-10周齡
適應性飼養(yǎng)后,用消毒棉拭子旋轉插入小鼠陰道內,并在陰道內輕輕轉動幾下后取出,涂于載玻片上,用95%酒精固定30min后晾干。涂片進行HE染色或瑞士染色,觀察動情周期。連續(xù)觀察2周,每日定時進行陰道涂片檢查,觀察動情周期。選擇連續(xù)有2個或2個以上正常動情周期(陰道涂片為大量無核角化細胞的大鼠),造模前一天每鼠肌注雌二醇0.1mg/(kg.d,大鼠),使動物統(tǒng)一處于動情期。
建模方法I:
大鼠:腹腔注射麻醉后,將大鼠固定,腹部剪毛,消毒,并在無菌條件下開腹。在尿道口上約1cm處做垂直正中縱切口長約2-3cm進腹。大鼠子宮呈Y型,分離左側子宮,近端離左子宮角1cm處結扎,遠端離卵巢2cm處結扎,并結扎兩端間的子宮系膜血管,切除長約1.5-2.0cm的子宮段,立即放入盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中,修剪去子宮漿膜外的脂肪組織,縱向切開子宮腔,剝去漿膜層及肌層,將子宮內膜片剪成5mm×5mm大小,移植到腹壁血管豐富處,注意其內膜面與皮下組織貼合。逐層縫合傷口,待老鼠自然蘇醒后常規(guī)飼養(yǎng)。術后每天注射,共3天。
建模4周后,開腹檢查所有造模大鼠移植的子宮內膜是否生長。若見移植物體積增大,形成表面被覆結締組織并有血管形成、內有液體積聚的透明小囊泡,則證明造模成功。
建模方法II:
小鼠:動情期C57BL/6小鼠,脫頸椎法處死,仰臥位固定,腹部酒精消毒后,鋪上無菌治療洞巾,戴無菌手套,在恥骨聯(lián)合上方0.5cm處,沿正中線剖開腹腔。找到Y形子宮,小心分別牽出左、右側子宮,細心分離雙側子宮系膜。離斷宮角與卵巢,在Y形子宮分叉分別剪斷左側及右側子宮,放入裝有10mL37℃生理鹽水的無菌彎盤中,反復漂洗子宮表面的血跡,進一步分離剩余粘附的子宮系膜。將兩個子宮角分別放置于兩個無菌彎盤中,將它們直接剪成大小約1mm3的大小均等的碎片,并將它們懸浮于37℃生理鹽水中。將捐贈鼠的子宮按1:2的比例接種于受鼠腹腔,用0.3mL生理鹽水懸浮彎盤里的組織碎片。
隨機取動情期C57BL/6小鼠,取臍下0.5cm偏正中線0.5cm處的左下腹為進針點,將溶有子宮組織碎片的0.3mL生理鹽水用20號針頭連同子宮組織快碎片注入接受鼠的腹腔,后放置于鼠籠。直至第9天。隨機取動物,處死后,取異位內膜,進行冰凍切片制備,HE染色觀察異位內膜病灶是否有典型的內膜腺體及間質,提示復制動物模型是否成功。
分子實驗平臺:高效運作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術、分子克隆與質粒構建、流式細胞儀檢測、免疫共沉淀、染色質免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實驗、酶聯(lián)免疫吸附測定、外泌體抽提及鑒定等實驗。
基因組學平臺:可以完成甲基化檢測、基因芯片分析、高通量測序等實驗。
蛋白組學平臺:能實現LC-MS、ITRAQ、蛋白質修飾分析等重點實驗項目。
病理學平臺:涉及免疫熒光染色、免疫組織化學染色、HE染色、特殊染色等實驗。
臨床前CRO服務:主要提供呼吸系統(tǒng)、神經系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學評價服務,包括靶點驗證、體內外模型的構建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評價、藥代
動力學和藥理學研究以及院內制劑研發(fā)等。
項目轉化服務:助力客戶進行方案設計、聯(lián)合課題申報、藥物項目引進和孵化,解決客戶對實驗技術平臺、專業(yè)人和融資的需求。
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