甲基化檢測(cè)原理:

甲基化特異性的PCR是種靈敏度高且操作相對(duì)簡(jiǎn)單的甲基化研究方法。重亞硫酸鹽處理DNA后，基因組DNA發(fā)生的由甲基化狀態(tài)決定的序列改變。隨后進(jìn)行引物特異性的PCR。該方法引物設(shè)計(jì)是關(guān)鍵。MSP中設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，即一對(duì)結(jié)合處理后的甲基化DNA鏈(引物對(duì)M)，另一對(duì)結(jié)合處理后的非甲基化DNA鏈(引物對(duì)U)。檢測(cè)MSP增產(chǎn)物，如果用引物M能擴(kuò)增出片段，則說(shuō)明檢測(cè)位點(diǎn)存在甲基化；若用引物U擴(kuò)增出片段，則說(shuō)明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化。

MSP:原理是基于DNA經(jīng)亞硫酸氫鈉處理后，所有未甲基化的胞腔啶發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的胞嘧啶則不變?；谶@種堿基的改變，然后設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物并進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增，然后通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析，確定與引物互補(bǔ)的DNA序列的甲基化狀態(tài)。

甲基化檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)：檢測(cè)靈敏度高，樣品消耗少，僅需1μg的基因組DNA,可用于石蠟包埋樣本；快速、簡(jiǎn)單，省時(shí)。

服務(wù)流程：
1.根據(jù)目的基因啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)相應(yīng)的引物；

2.基因組DNA的提取和定量；

3.亞疏酸氫鈉修飾基因組DNA；

4.修飾后DNA純化回收；

5.a.結(jié)合實(shí)時(shí)定量PCR的qMSP；
  b.BSP，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序并與未經(jīng)處理的序列比較；

6.數(shù)據(jù)處理：向客戶(hù)提供數(shù)據(jù)分析結(jié)果與實(shí)驗(yàn)報(bào)告。