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羧基純化磁珠產品介紹：

羧基活化的 SepFast MAG 用于制備磁層析介質。 它與含有伯胺基團的配體形成化學穩(wěn)定的酰胺鍵。 它有一個長間隔區(qū)（9 個原子）。 目標分子結合后，磁性樹脂可以很容易地在磁鐵的幫助下從生物原料中分離出來。 羧基活化瓊脂糖可用于固定含胺分子。 耦合化學是基于碳二亞胺的，是一種成功且有據可查的技術。

羧基純化磁珠產品特性：

羧基活化的 SepFast MAG 4HF 由高度交聯的 4% 瓊脂糖磁性材料制成。 它使更苛刻的操作條件成為可能，因此可以應用低 pH 值和某些高濃度有機溶劑。 由于瓊脂糖具有出色的親水性和低非特異性結合特性，長期以來一直用于色譜分離。 這些顆粒具有開孔結構，對大蛋白質分子具有出色的傳質特性。 通過將長的親水性間隔臂連接到骨架上來激活基礎基質。 它在碳二亞胺試劑存在下直接與伯胺基反應。 羧基活化的 SepFast MAG 以 20% 乙醇中的水懸浮液形式提供。

羧基純化磁珠使用流程：

1.配體固定化

以下是配體一般的偶聯流程。

（1）將目標配體溶解在偶聯緩沖液中，將pH值調整為4.5。偶聯緩沖液的體積可以是固定凝膠體積的一半或相同。

（2）在過濾裝置中用至少5倍體積的偶聯緩沖液清洗羧基活化凝膠。

（3）將洗凈并吸干的凝膠（來自步驟2）轉移到步驟1制備的溶液中。

（4）將碳二亞胺作為干粉或預先溶解的溶液添加到漿液中至終濃度為0.1 M。如果碳二亞胺預先溶解在水中，則將pH值調整為4.5。

（5）在室溫或4-8℃下混合漿料。

（6）在第1個小時內通過添加 0.1 M NaOH調節(jié)反應pH值至4.5。

（7）將偶聯反應放置2-24小時。

（8）用5倍體積的0.1 M醋酸鹽緩沖液+0.5M NaCl，pH4.0洗滌凝膠，然后用5倍體積的0.1 M Tris/HCl+0.5 M NaCl，pH 8.0洗滌凝膠。重復上述洗滌2次以上。

（9）使用前用工作/平衡緩沖液清洗凝膠。

2. 固定化效率的一般考慮

（1）pH

偶聯反應在pH4.5-7.5之間非常有效地進行。但是可以優(yōu)化偶聯pH以獲得最佳結果（例如，高偶聯產率和高配體活性）。在偶聯反應的第1個小時內，pH值會降低。要記得通過添加0.1 M NaOH來調節(jié)偶聯pH值。之后pH值會趨于穩(wěn)定。

（2）偶聯方案

去離子水可直接用作偶聯溶液。應避免使用含有氨基、巰基或羧基的緩沖溶液，因為它們會與配體偶聯發(fā)生競爭。可以引入稀釋的某些有機溶劑以提高配體的溶解度。應事先測試此類溶劑的適用性。

（3）碳二亞胺的選擇

應使用水溶性碳二亞胺，例如1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)或1?環(huán)己基?3?(2?嗎啉代乙基)碳二亞胺(CMC)（通常合成為metho?p?甲苯磺酸鹽）。EDC是常用的碳二亞胺試劑。

（4）碳二亞胺的濃度

添加的碳二亞胺的量應以化學計量的方式超過活化的羧基。建議以最終反應漿料中的0.1 M作為起點。

（5）反應時間和溫度

可以優(yōu)化偶聯過程中配體和活化填料之間的接觸時間以保持配體的生物活性。典型的反應時間是在室溫或冷藏室中過夜。

（6）屏蔽剩余的活化配體

如果加入過量的配體，則可能不需要封閉殘留的活化基團。未與配體反應的活化基團應在碳二亞胺存在下通過添加額外的含有pH 8 - 9伯胺的小分子（例如1 M乙醇胺）來封端。

（7）最終填料的洗滌

偶聯反應后需要將未連接或弱連接的配體洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗滌方法可以確保有效去除不需要的物質。

3.固定化親和填料的使用

配體偶聯填料可用于使用間歇攪拌罐模式或填充柱模式的純化。處理這種材料遵循與處理其他基于瓊脂糖基質相同的原則。

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