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蛋白質(zhì)的純化方法

閱讀:613      發(fā)布時間:2024-6-13
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  蛋白質(zhì)的純化方法蛋白純化是指通過基因工程技術(shù)將編碼蛋白的核酸序列導(dǎo)入到宿主細胞,使其大量表達,再使用適當?shù)募兓椒▽⑵湓隗w外純化出來,從而獲得高純度、活性和產(chǎn)量的蛋白質(zhì)。那么蛋白質(zhì)的純化方法都有什么嗎?讓我們一起來看看吧!一、凝膠層析:根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì),不同蛋白的形態(tài)和分子大小存在差異,在混合物通過含有填充顆粒的凝膠層析柱時,由于各種蛋白的分子大小不同,擴散進入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也不同,大的蛋白分子會被先洗脫出來,分子越小越晚洗脫。二、離子交換層析:基于蛋白表面所帶電荷量不同進行蛋白分離純化,蛋白表面通常會均勻帶有一定的電荷,在一定條件下可以與正/負離子交換柱結(jié)合。在改變pH或者用逐漸增加離子強度的緩沖液洗脫時,結(jié)合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同,與離子交換柱的結(jié)合能力也不同,因此被洗脫到溶液中的順序也不同。三、疏水相互作用層析:利用蛋白質(zhì)的疏水性,蛋白經(jīng)變性處理或處于高鹽環(huán)境下疏水殘基會暴露于蛋白表面,不同蛋白疏水殘基與固定相的疏水性配體之間的相互作用強弱不同,依次用從高至低離子強度洗脫液可將疏水性由弱至強的成分分離。四、親和層析:將待純化的某一蛋白質(zhì)(或在蛋白質(zhì)上加上標簽)的特異配體通過適當?shù)幕瘜W(xué)方法共價連接到載體分子上,當?shù)鞍踪|(zhì)混合物加到填有親和介質(zhì)的層析柱時,待純化的蛋白質(zhì)與配體特異性結(jié)合,而其他蛋白質(zhì)則不被結(jié)合,通過洗滌除去,被特異結(jié)合的蛋白質(zhì)可以用含游離的相應(yīng)配體溶液洗脫下來。更多有關(guān)蛋白質(zhì)的純化方法,請聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司!

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