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　　液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)與液相二級(jí)質(zhì)譜(LC-MS-MS)都是實(shí)驗(yàn)室精密的檢測(cè)儀器，二者非常相似，但也有很大的區(qū)別，今天將這兩個(gè)進(jìn)行對(duì)比，分析兩者的區(qū)別與聯(lián)系。

　　LC-MS可以通過(guò)采集質(zhì)譜得到總離子色譜圖。由于電噴霧是一種軟電離源,通常很少或沒(méi)有碎片,譜圖中只有準(zhǔn)分子離子，因而只能提供未知化合物的分子量信息，不能提供結(jié)構(gòu)信息。很難用來(lái)做定性分析，可以用來(lái)定量分析。但單級(jí)MS如果不用軟電離源，而是EI之類的話，就有碎片峰，可以提供分子結(jié)構(gòu)信息。

　　LC-MS/MS采用串聯(lián)質(zhì)譜，既能得到分子離子峰，又有碎片離子峰，因而可以用來(lái)進(jìn)行定性和定量分析。

　　一個(gè)基本相似之處是：他們的應(yīng)用領(lǐng)域都適用于液相適用的領(lǐng)域。

　　質(zhì)譜的突出特點(diǎn)是：它本身是有質(zhì)量信息的，是可以靠這個(gè)質(zhì)量信息定性或提供定性的一些依據(jù)的(還需要其它的一些定性儀器)。其次，質(zhì)譜本身也有一個(gè)分離作用，就是按照質(zhì)量的分離，如果液相分離了一次，那LC-MS就分離了兩次，而LC-MS/MS就分離了三次，LC-MS3就分離了四次....(3級(jí)以上是離子阱質(zhì)譜的特點(diǎn))。

　　LC-MS和LC-MS/MS(或MSn)的區(qū)別是：如果你關(guān)心的結(jié)果是你樣品中的主成分，而且是你已經(jīng)知道的目標(biāo)物，比如質(zhì)控、有機(jī)合成后看一下純品、部分的農(nóng)藥全分析工作、藥物合成中前導(dǎo)化合物的指導(dǎo)(合成一鍋就打一針看看合成得對(duì)不對(duì))等等，都可以用LC-MS。因?yàn)樗鼙阋?，操作也很?jiǎn)單。即使有些東西液相沒(méi)分開(kāi)，但只要你關(guān)心的是主成分，影響都不大。通過(guò)調(diào)整一下液相條件，或做完掃描圖直接看提取離子圖，或做SIM都可以。這些領(lǐng)域用LC-MS/MS是大材小用，花這么多錢是浪費(fèi)。

　　而如果你關(guān)心的結(jié)果是：(1)未知的東西，打一針LC-MS無(wú)法定性，需要更多的碎片信息;(2)是混合物中的痕量成分。

　　那你必須用LC-MS/MS：LC-MS/MS可以給出需要更多的碎片信息，幫助你來(lái)定性;LC-MS/MS可以降低背景噪音，讓痕量組分的譜圖不受豐量物質(zhì)的干擾;LC-MS/MS可以降低很多背景噪音，使你的化合物的靈敏度大幅提高，定量結(jié)果變好。

　　一、LC-MS-MS如何用內(nèi)標(biāo)定量分析Q1：本人現(xiàn)在用三重四級(jí)桿LC-MS/MS定量分析目標(biāo)物，但是沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品。內(nèi)標(biāo)法該具體怎么操作呢?Q2：資料說(shuō)先配制一定重量比的待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析，測(cè)量峰面積，做重量比和面積比的關(guān)系曲線，此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果這樣的話，沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品怎么辦?

　　方法一：(1)內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析，同樣需要待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品。如果沒(méi)有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品就不能準(zhǔn)確測(cè)量其含量，因?yàn)闊o(wú)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(2)沒(méi)有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品不能準(zhǔn)確測(cè)量其含量，但可以通過(guò)加入內(nèi)標(biāo)的方法測(cè)量待測(cè)物的相對(duì)含量，可以比較待測(cè)物在各樣品中的多少及相差倍數(shù)。(3)用LC-MS-MS做定量一般都采用MRM的掃描方式，你沒(méi)有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品，就無(wú)法建立和優(yōu)化MRM掃描的質(zhì)譜參數(shù)，這樣你只能使用FULL SCAN或SIM的掃描方法。沒(méi)有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品，你也無(wú)法準(zhǔn)確得到待測(cè)物在LC上的保留時(shí)間，如果你的樣品中有與待測(cè)物相似質(zhì)量數(shù)的化合物，你得到的色譜峰就不會(huì)很純凈，會(huì)對(duì)你判定哪個(gè)是你的待測(cè)化合物產(chǎn)生干擾。

　　方法二：沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品，就只用面積相對(duì)定量。然后選用LC-MS/MS的SIM模式(樣品雜質(zhì)比較少，選擇同位素豐度為100%的分子量，上下增減0.2)。考察因素導(dǎo)致的量的改變比較微量，選擇一種物質(zhì)為回收率指示物(反應(yīng)液前處理前加入)，一種物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)物(前處理后、液相小瓶中進(jìn)樣測(cè)試前，在待測(cè)樣品中加入定量的內(nèi)標(biāo)物，然后進(jìn)行測(cè)試)。

　　二、LC-MS可以進(jìn)行定量分析嗎Q1：LC-MS如何進(jìn)行定量分析?Q2：請(qǐng)問(wèn)液質(zhì)聯(lián)用中質(zhì)譜跑出來(lái)用于定性的圖譜是什么樣的，既然是用質(zhì)譜來(lái)進(jìn)行定量的話，那色譜本身配置的紫外檢測(cè)器跑出來(lái)的圖譜用于何用?Q3：液質(zhì)聯(lián)用有SIM和全掃描的，那么一般在藥物代謝動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中一般用哪一種呢?尤其是在對(duì)體內(nèi)藥物分析時(shí)，內(nèi)標(biāo)法用于定量的質(zhì)譜圖是什么樣的?

　　質(zhì)譜定量分析，使用的一般是LC-MS/MS,不使用LC-MS, 看一下質(zhì)荷比，推測(cè)下分子量。UV可以用來(lái)定量，但是在有紫外吸收的干擾峰的時(shí)候，定量是不準(zhǔn)的。LC-MS/MS使用母離子/子離子來(lái)進(jìn)行定量，相對(duì)來(lái)說(shuō)，干擾要少的多，也比較準(zhǔn)確，在PK/TK的應(yīng)用很廣泛。這里只有LC-MS/MS定量的譜圖，僅供參考!183.1/141.3 通道的是內(nèi)標(biāo)，其他的兩個(gè)是化合物。

　　質(zhì)譜定量中已經(jīng)被廣泛接受的方式是MS/MS定量。這種定量常通過(guò)三級(jí)四極桿或離子阱質(zhì)譜實(shí)現(xiàn)。

　　要求使用MS/MS的原因是：許多化合物有同樣的質(zhì)量。當(dāng)使用第①個(gè)維度即單級(jí)質(zhì)譜MS去定量時(shí)，也會(huì)缺乏特異性，尤其是對(duì)于像血液那樣的復(fù)雜的基質(zhì)。第二個(gè)維度的MS(即MS/MS)在大多數(shù)情況下，能夠提供唯①的斷裂。合并特異的母離子質(zhì)量和唯①的碎片離子信息，可以選擇性地監(jiān)測(cè)被定量的化合物。

　　三、LC-MS/MS如何進(jìn)行定量分析Q1：我想用LC-Q-TOF-MS 來(lái)做代謝組學(xué)，因?yàn)槭菢悠肥求w液含有多種化合物，想加入內(nèi)標(biāo)后*行一個(gè)相對(duì)的定量來(lái)判斷含量發(fā)生變化的化合物，怎樣去定量?Q2：用總離子流圖好像不合適，如果利用峰面積進(jìn)行相對(duì)定量的話，用哪個(gè)圖比較合適?必須得用標(biāo)準(zhǔn)品才能定性嗎?

　　LC-MS-MS定量分析使用SIM 或MRM模式。*的MRM更為準(zhǔn)確。SIM使用Q選擇性的濾過(guò)選中的分子量。但是分子量相同的化合物很多，所以，如果樣品稍微復(fù)雜的話，SIM基本不合適。

　　MRM選擇母離子和子離子。使用Q過(guò)濾母離子，q 轟擊母離子，TOF過(guò)濾子離子，使子離子被檢測(cè)器檢測(cè)到。分子量相同，轟擊后產(chǎn)生的子離子不一樣的干擾離子就被排除了。所以，MRM模式是更為可靠的LC-MS定量分析方法。MRM檢測(cè)是離子對(duì)。

　　內(nèi)標(biāo)的選擇原理是結(jié)構(gòu)基本和待測(cè)化合物類似。結(jié)構(gòu)相同或類似，主要是為了滿足被離子化的效率與樣品類似。這就是為什么很多都選擇使用該化合物或此類化合物的氘代化合物。內(nèi)標(biāo)的選擇還要求其分子量與待測(cè)物質(zhì)不重合(還需要盡量避開(kāi)化合物的isotopic peak的m/z)，并且可以和待測(cè)物質(zhì)分開(kāi)。

　　如果使用MRM, 樣品被分開(kāi)的話，那么理論上來(lái)說(shuō)總離子流圖上的每個(gè)峰都是代表一種物質(zhì)。同時(shí)使用MRM模式，如果樣品們的分子量與子離子不重疊，那么，即使在柱子中不被分開(kāi)的化合物，也是可以認(rèn)為在MS中被分開(kāi)了。

　　文獻(xiàn)報(bào)道的液質(zhì)中幾個(gè)峰，MRM檢測(cè)到幾十個(gè)物質(zhì)就是多個(gè)物質(zhì)在同一時(shí)間從色譜柱跑出來(lái)了。雖然出峰時(shí)間一樣，但是每個(gè)化合物的peak應(yīng)該是軟件中可以顯示出來(lái)的，只不過(guò)報(bào)道中由于篇幅有限，會(huì)被簡(jiǎn)略掉。定性的話，需要標(biāo)品，retention time 需要一致。

　　定量的話，需要先作標(biāo)準(zhǔn)曲線(峰面積比與濃度)。

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