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如何避免液相色譜柱的損壞呢？
如何避免液相色譜柱的損壞呢？
在液相色譜的使用中，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室會(huì)面臨色譜柱頻繁損壞的問(wèn)題。
損壞的來(lái)源
先來(lái)了解一下色譜柱的損壞來(lái)源于哪些方面：
1泵頭密封圈的磨損
2進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子密封圈的磨損
3析出的緩沖鹽
4樣品中的復(fù)雜易吸附基質(zhì)，柱壓過(guò)高等。
其實(shí)，在工作過(guò)程中大多數(shù)的顆粒物堵塞導(dǎo)致的色譜柱背壓升高問(wèn)題是體現(xiàn)在柱頭堵塞。
而樣品的易吸附機(jī)制也可能會(huì)和柱前端的硅膠表面游離的硅醇基發(fā)生作用導(dǎo)致色譜柱背壓升高。
但是這種情況在較低的PH系統(tǒng)中會(huì)有所改變，因?yàn)檩^低的PH系統(tǒng)會(huì)降硅膠表面的硅醇基發(fā)生解離。
5柱效低
可能是色譜柱被污染、 過(guò)濾片部分堵塞、色譜柱內(nèi)的死體積造成，
例如流動(dòng)相pH值或者組成不適造成固定相損失。流動(dòng)相變化快，造成固定相物理?yè)p壞，機(jī)械振動(dòng)造成固定相產(chǎn)生裂縫，柱床收縮或干枯。也有可能是儀器連接的問(wèn)題，認(rèn)真檢查進(jìn)樣器、檢測(cè)器、管路、保護(hù)柱和在線過(guò)濾器等是否連接好，也可能是色譜柱沒(méi)有平衡好， 進(jìn)樣量過(guò)大等問(wèn)題。
6重復(fù)性差、不出峰、回收率低
可能是色譜柱被污染，流動(dòng)相p H值或者組成不適造成固定相損失 ，樣品溶劑不同或樣品本身不穩(wěn)定，固定相極性過(guò)強(qiáng)或者流動(dòng)相極性過(guò)弱．或者發(fā)生非特異性吸附。也可能梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)平衡時(shí)間不足，溫度波動(dòng)，流動(dòng)相組成改變，樣品溶劑不同， 樣品穩(wěn)定性不好，方法的開(kāi)發(fā)不好，緩沖液的酸堿度不合適或者緩沖能力不足。
防護(hù)措施
為了降色譜柱的損耗問(wèn)題，我建議大家在使用色譜柱時(shí)可以做一些防護(hù)。例如：
1在液相系統(tǒng)中加入在線過(guò)濾器
在線過(guò)濾器的內(nèi)顆?？障兑话闶?.5微米，對(duì)于UHPLC會(huì)選擇0.2微米空隙的在線過(guò)濾器。這個(gè)空隙尺寸和柱頭的過(guò)濾篩板尺寸接近或者略小。
不同公司的在線過(guò)濾器
所以，在線過(guò)濾器能夠有成果的阻擋來(lái)自樣品、泵頭密封墊、自動(dòng)進(jìn)樣器的轉(zhuǎn)子密封墊的顆粒物，以防柱頭過(guò)濾篩板的堵塞。
注意：但是對(duì)于低死體積的液相系統(tǒng)，在線過(guò)濾器的加入可能會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)死體積大峰展寬變嚴(yán)重的問(wèn)題。而對(duì)于大多數(shù)的液相系統(tǒng)而言，色譜圖不會(huì)有太大變化。
2在柱子前端使用保護(hù)柱
保護(hù)柱有很多種，通用型、一體式、卡套式，但是它其實(shí)是一個(gè)和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子。
因?yàn)樗哂泻头治鲋嗤膬?nèi)填料，所以保護(hù)柱可以阻擋顆粒物，還可以阻擋易吸附的樣品基質(zhì)組分。
不同公司的保護(hù)柱
注意：由于保護(hù)柱中可能有大量的強(qiáng)保留組分，在用強(qiáng)溶劑清洗系統(tǒng)時(shí)請(qǐng)取下保護(hù)柱，以防這些強(qiáng)保留組分被洗脫進(jìn)分析柱。保護(hù)柱如果出現(xiàn)吸附飽和也可能會(huì)對(duì)分離成果有影響。
3對(duì)樣品進(jìn)行凈化處理
有一些液相的分析方法沒(méi)有明確標(biāo)注樣品的凈化，但我希望大家在做分析時(shí)能夠考慮樣品的凈化，常用的方案是對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾。
色譜柱的儲(chǔ)存
在實(shí)際工作中，色譜柱的儲(chǔ)存也會(huì)影響柱子的使用壽命。那么對(duì)于色譜柱的儲(chǔ)存，也有以下建議：
短期儲(chǔ)存時(shí)
應(yīng)該保存在接近常用的流動(dòng)相條件下。并且，要把系統(tǒng)中的緩沖鹽、酸等移除。
長(zhǎng)期儲(chǔ)存時(shí)
按照說(shuō)明書(shū)的要求將色譜柱保存在對(duì)應(yīng)的溶劑中，并且將色譜柱從系統(tǒng)中取下兩頭用堵頭堵死。