流動相為什么要過濾?
*,色譜系統(tǒng)是一種精密的設備,對結(jié)果的準確性要求也很高,因此,由于色譜系統(tǒng)的精密性和對結(jié)果分析的準確性要求,對樣品的過濾顯得尤為重要。我們在樣品制備的每步不可掉以輕心。正如液相色譜系統(tǒng)的說明書中所要求的,流動相得須使用HPLC的試劑,且使用前須過濾。
為什么要減壓過濾?
過濾可以保護色譜系統(tǒng)和色譜柱,長柱子的使用壽命,改善數(shù)據(jù)的精度。過濾可以消由于摩擦產(chǎn)生顆粒而引起的壓力波動和無規(guī)律的雜質(zhì)引起的基線波動。同時,過濾也能夠去流動相中的顆粒雜質(zhì),免它們對內(nèi)密封圈造成損害,或堵塞小孔管道、層析柱、線內(nèi)過濾器及保護柱。
一般流動相在上儀器前須經(jīng)過兩個步驟:減壓抽濾和超聲
減壓抽濾有兩個目的,
一個是過濾掉氣體,尤是有機相和水相混合的時候,會產(chǎn)生大量的氣泡。這些氣泡進入儀器就會堵住儀器和色譜柱,所以要除掉。
一個是過濾掉不溶性微粒。你看一般的過濾膜是4.5um孔徑的,這個是針對你的色譜柱而定的。色譜柱一般是5um的粒徑,過濾的流動相里面小的毛絮啊,顆粒啊不會進入色譜柱。
超聲的主要目的也是為了脫氣,另外還助令溶液混合均勻等作用。不過超聲主要是為了去掉溶劑瓶瓶壁和瓶底的氣泡,所以沒要超聲太久的時間,3-5min夠了。
總而言之,都是為了保護儀器和色譜柱,防氣泡和雜質(zhì)進入。
過濾用什么?
一般建議使用的過濾器。也許有人認為,過濾裝置貌似挺貴,算了,買個砂芯漏斗得了。哎,同學,這么貴的房子都買了,還在乎一把鎖?
使用的流動相過濾器,簡單,而且全。
如何過濾?
只要按照下圖的說明,依次放置好濾器和管線,再啟動真空泵可開始過濾。
在操作過程中,有一點需要注意,須用干燥的過濾膜和干燥的支撐底座進行過濾,以防空氣在膜上形成氣阻,這個阻力可使液體流速下降或阻止液體流出。在將過濾膜放在濾器上之前,須保濾器是清潔、干燥的。