| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | D283 Med 人腦髓母細胞瘤細胞（STR鑒定正確） | |||
| 細胞別稱 | D283 MED; D283-MED; D-283 Med; D-283MED; D283MED; D283Med; D283-Med; D283; Med 283; H283 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 男，6歲 | |||
| 組織來源 | 腦組織 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | |||
| 背景介紹 | D283 Med細胞是由Friedman等人于1985年建系，源自一名6歲患有神經(jīng)管細胞瘤有腹腔轉(zhuǎn)移的白人男性小孩的腹水細胞。 | |||
| 細胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| STR位點 | Amelogenin：X，Y；CSF1PO：9，12；D13S317：8，10；D16S539：11；D18S51：16，18；D19S433：13，14；D21S11：28，30.2；D2S1338：17，23；D3S1358：15；D5S818：11，OL；D7S820：10；D8S1179：12，13；FGA：20，23；TH01：7；TPOX：8，11；vWA：16，18； | |||
| 細胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 倍增時間 | ~52 hours | |||
| 保藏機構(gòu) | ATCC; HTB-185IZSLER; BS TCL 203KCB; KCB 2010201YJ | |||
| 基因表達情況 | The cells produce tumors in nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100 (S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity) | |||
| 致瘤性 | Yes, in nude mice(The cells form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.)Yes, in soft agar | |||
| 培養(yǎng)基 | MEM（含NEAA）＋10% FBS＋PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) | 收到細胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗D283 Med細胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若D283 Med細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有D283 Med細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 | ||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存； 2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 3.由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 | |||
| 備注：客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞密度 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a、收集D283 Med細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。 b、根據(jù)D283 Med細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)； 3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇 2 天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)； 6.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
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