DH5α  Electro
DH5α  Electroporation-Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格:

DH5a 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞基因型：
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1
gyrA96 relA1 phoA

DH5a 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞簡要說明：
CMbio-DH5α電擊感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。 CMbio-DH5α菌株是實(shí)驗(yàn)室最常用的感受態(tài)細(xì)胞。
缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證 了插入 DNA 的穩(wěn)定性；lacZΔM15 的存在使 DH5α可用于藍(lán)、白斑篩選。
CMbio-DH5α電擊感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 1×1010 cfu/μg DNA。
DH5a 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞操作說明：

一、0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5 分鐘，使乙醇充分揮

發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，冰中靜置 5 分鐘充分降溫。 二、取-80℃保存的 DH5α電擊感受態(tài)細(xì)胞插入冰中 5 分鐘，待其融化，加入目的 DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手 EP     管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。-CMbio
A. 測定轉(zhuǎn)化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對照質(zhì)粒 pUC19；   -CMbio

B. 對于連接產(chǎn)物，請用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重懸，DNA 濃度 不超過 100ng/μl，體積不超過 5μl/50μl  感受態(tài)。 -CMbio
三、用 200 μl 槍頭將感受態(tài)-DNA 混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。 四、啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù)，也可按所用電轉(zhuǎn)儀 推薦的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。-CMbio
五、2 分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入 700 μl 不含抗生素的無菌 S.O.C. 培養(yǎng)基（室溫），用 1ml 槍吹吸電 擊杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到 50ml 離心管（BD Falcon50ml 錐形離心管等），向離心管中補(bǔ)加 S.O.C. 培養(yǎng)基至 5ml。 37℃，225 rpm 復(fù)蘇 60 分鐘。-CMbio
六、5000rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應(yīng)抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量較大，若全部涂 板請選用直徑 15cm 培養(yǎng)皿 2-5 個(gè)）。將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng) 13-17 小時(shí)。-CMbio
DH5a 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：
（一）加入 DNA 時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的 1/10。-CMbio

（二）電擊感受態(tài)細(xì)胞加入電擊杯應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會增加弧光放電風(fēng)險(xiǎn)。

（三）當(dāng) DNA 不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時(shí)，轉(zhuǎn)化效率急劇下降。-CMbio

（四）電擊杯里的離子可增加溶液的電導(dǎo)，增大在含有細(xì)胞和 DNA 的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風(fēng)險(xiǎn)。

（五）若轉(zhuǎn)化大質(zhì)?；蛳氆@得較高轉(zhuǎn)化效率，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率 下降一個(gè)數(shù)量級。-CMbio
（六）對于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化前乙醇沉淀 DNA 后用適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA) 重懸產(chǎn)物，保證 DNA 濃度不超過 100 ng/μl。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會降低轉(zhuǎn)化效率，增加弧光放電
的風(fēng)險(xiǎn)。-CMbio

（七）混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作，吸取感受態(tài)細(xì)胞時(shí)不可用孔徑過小的槍頭 (普通 200ul 槍頭應(yīng)剪去槍頭尖 0.6cm) 避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細(xì)胞膜，降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板 的菌量。-CMbio
（八）電擊感受態(tài)細(xì)胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率會下降。-CMbio