問(wèn):正常使用一個(gè)C18液相色譜柱能用多長(zhǎng)時(shí)間?
答:柱壽命一般不按時(shí)間計(jì)算,按持續(xù)進(jìn)樣針數(shù)比較科學(xué)。一般正常使用維護(hù),不超過(guò)pH和溫度等范圍,C18柱能達(dá)到500-2000針進(jìn)樣的壽命,視樣品干凈程度的不同而不同。
問(wèn):一根常用的c18色譜柱,拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)?為什么要這樣做?
答:新柱活化,實(shí)際上是一個(gè)平衡的過(guò)程,除了用流動(dòng)相平衡外,有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡,特別是測(cè)定分子量比較高的多肽,尤其重要。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子,擴(kuò)散速度慢,平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長(zhǎng)。具體平衡方式也很簡(jiǎn)單,多進(jìn)幾次樣品,直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定,再進(jìn)行正式進(jìn)樣測(cè)定。
如果要加快平衡時(shí)間,把前面用來(lái)平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大,或者不等洗脫完成,連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測(cè)物對(duì)新柱平衡,目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。
問(wèn):做農(nóng)藥殘留分析的,不同的基質(zhì)雜質(zhì)含量是不同的,我用C18分析時(shí)有可能一次就污染了,我用高流速,和反向沖洗都解決不了,是不是這根柱子就廢了,有沒(méi)有其他的辦法?
答:高流速反向沖洗是對(duì)的,關(guān)鍵你用了什么溶劑沖洗呢?用原來(lái)的流動(dòng)相沖洗肯定不管用,要不然就不會(huì)累積在柱子上了。你應(yīng)該用流動(dòng)相中的強(qiáng)溶劑B沖洗,如果不行,就需要啟用再生的程序,當(dāng)然再生時(shí)用的溶劑更強(qiáng)。
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