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詳細(xì)介紹
1.產(chǎn)品名稱：小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14
2.組織來(lái)源：海馬體組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14分離自海馬體；海馬體（Hippocampus），又名海馬回、海馬區(qū)、大腦海馬，海馬體主要負(fù)責(zé)記憶和學(xué)習(xí)。海馬神經(jīng)元細(xì)胞是海馬區(qū)的主要細(xì)胞組成，主要功能是參與近期記憶、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng)，在學(xué)習(xí)、記憶、情緒反應(yīng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理變化等方面有重要作用，而且海馬組織是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的神經(jīng)干細(xì)胞聚集區(qū)，具有高度序化板層結(jié)構(gòu)和神經(jīng)元相對(duì)獨(dú)立分布的特點(diǎn)，境界相對(duì)清晰，便于取材，因此，海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究者當(dāng)做理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)特性和外源干擾因素作用（細(xì)胞因子）的有效細(xì)胞模型，其在神經(jīng)生物學(xué)，發(fā)育生物學(xué)體外實(shí)驗(yàn)研究中已被廣泛應(yīng)用。
本公司生產(chǎn)的小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞采用胰蛋白酶消化法、化學(xué)試劑抑制法結(jié)合神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)MAP-2免疫熒光鑒定，純度可達(dá)85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：Neurobasal-A、B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
細(xì)胞的培養(yǎng)
體外神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)已成為神經(jīng)生物學(xué)研究中十分有用的技術(shù)手段。神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)的主要優(yōu)點(diǎn)是:(1)分散培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞在體外生長(zhǎng)成熟后,能保持結(jié)構(gòu)和功能上的某些特點(diǎn), 而且長(zhǎng)期培養(yǎng)能形成髓鞘和建立突觸聯(lián)系,這就提供了體內(nèi)生長(zhǎng)過(guò)程在體外重現(xiàn)的機(jī)會(huì)。(2)能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)直接觀察活細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、形態(tài)和功能變化,便于使用各種不同的技術(shù)方法如相差顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、同位素標(biāo)記、原位雜交、免疫組化和電生理等手段進(jìn)行研究。(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化學(xué)和生物因子（如神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子）等實(shí)驗(yàn)條件, 觀察條件變更對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的直接或間接作用。(4)便于從細(xì)胞和分子水平探討某些神經(jīng)疾病的發(fā)病機(jī)制，藥物或各種因素對(duì)胚胎或新生動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞在生長(zhǎng)、發(fā)育和分化等各方面的影響。 我們實(shí)驗(yàn)室從80年代始開(kāi)展了神經(jīng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)工作，取得了一些經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)將培養(yǎng)細(xì)胞分類及方法簡(jiǎn)要介紹如下:
一、雞胚背根神經(jīng)節(jié)組織塊培養(yǎng)
主要用于神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）等神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的生物活性測(cè)定。在差倒置顯微鏡下觀察以神經(jīng)突起的生長(zhǎng)長(zhǎng)度和密度為指標(biāo)半定量評(píng)估NGF的活性。
1、材料和方法
（1）選正常受精的雞蛋，置于37℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)孵化，每日翻動(dòng)雞蛋一次。
（2）取孵化8-12 d 的雞蛋, 用70% 酒精消毒蛋殼，從氣室端敲開(kāi)蛋殼，用消毒鑷剝除氣室部蛋殼。
（3）用彎鑷鉤住雞胚頸部，無(wú)菌條件下取出雞胚置小平皿內(nèi)，除去頭部后，腹側(cè)向上置滅菌毛玻璃片上,用眼科彎鑷子打開(kāi)胸腹腔，除去內(nèi)臟器官。
（4）在解剖顯微鏡下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其兩側(cè)，在椎間孔旁可見(jiàn)到沿脊柱兩側(cè)排列的背根節(jié)（圖1），用一對(duì)5號(hào)微解剖鑷小心取出。
（5）置背根節(jié)于解剖溶液內(nèi)，用微解剖鑷去除附帶組織，接種于涂有鼠尾膠的玻璃或塑料培養(yǎng)瓶中，在DMEM無(wú)血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)。
2、結(jié)果
雞胚背根神經(jīng)節(jié)在含神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF, 2.5S，20ng/ml)的無(wú)血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h,神經(jīng)節(jié)長(zhǎng)出密集的神經(jīng)突起。而未加NGF的神經(jīng)節(jié)培養(yǎng)24 h, 未見(jiàn)神經(jīng)突起生長(zhǎng)。
二、新生大鼠、新生小鼠及雞胚背根神經(jīng)節(jié)分散細(xì)胞培養(yǎng)
背根神經(jīng)節(jié)（DRG）細(xì)胞起源于神經(jīng)嵴，NGF研究Levi-Montalcini的實(shí)驗(yàn)表明，外原性NGF能刺激DRG細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育并形成廣泛的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。在體外，分離培養(yǎng)的神經(jīng)節(jié)在NGF存在的情況下，神經(jīng)突起的生長(zhǎng)在一天之內(nèi)可長(zhǎng)達(dá)數(shù)毫米，因此，利用培養(yǎng)的DRG細(xì)胞，進(jìn)行軸突生長(zhǎng)發(fā)育的研究，是為經(jīng)典而常用的方法之一。
1、材料和方法
取新生一天的大鼠(wistar種)和小鼠(昆明種)。用眼科剪在無(wú)菌條件下除去背部皮膚, 然后剪取一段脊髓,背側(cè)朝上置于滅菌毛玻璃片上,在解剖顯微鏡下沿椎管兩側(cè)水平剪除腹側(cè)一半椎骨,暴露脊髓和神經(jīng)節(jié),用解剖鑷分離出神經(jīng)節(jié)。雞胚背根神經(jīng)節(jié)的取材方法同前。 剝除神經(jīng)節(jié)被膜, 用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)分散后用種植(Plating)培養(yǎng)液稀釋成0.2×105 個(gè)細(xì)胞/ml密度的細(xì)胞懸液，接種于涂有鼠尾膠的35mm塑料培養(yǎng)皿中,每皿2ml細(xì)胞懸液置。置標(biāo)本于36℃、10%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后傾去培養(yǎng)皿內(nèi)種植培養(yǎng)液，改用飼養(yǎng)(Feeding)培養(yǎng)液培養(yǎng)。接種第3d, 在培養(yǎng)皿中分別加入細(xì)胞分裂抑制劑5-氟-2'-脫氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml以抑制非神經(jīng)細(xì)胞的增殖, 作用48 h后更換新鮮飼養(yǎng)培養(yǎng)液，以后每周換液兩次, 每次更換一半新鮮飼養(yǎng)培養(yǎng)液。
2、培養(yǎng)液成份
種植培養(yǎng)液: 80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L);10%胎牛血清; 10%馬血清;NGF 20ng/ml; 谷氨酰胺100μg/ml。脫氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。
飼養(yǎng)培養(yǎng)液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L,)；5 % 馬血清； NGF 20ng/ml；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素 1ml/100ml；谷氨酰胺100μg/ml。
我們推薦使用小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：CM-M107）作為體外培養(yǎng)小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的培養(yǎng)基。
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