產(chǎn)品及特點(diǎn) 本酵母電感受態(tài)細(xì)胞制備試劑是一種通過(guò)化學(xué)處理釀酒酵母和裂殖酵母電感
受態(tài)細(xì)胞，使之不但馬上能用于電轉(zhuǎn)化，還能長(zhǎng)期放置后用于電轉(zhuǎn)化。

裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1. 操作簡(jiǎn)單，單溶液制備，除酵母培養(yǎng)的時(shí)間外，整個(gè)操作只需要 10 余分鐘。
2. 制備得到的感受態(tài)細(xì)胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次轉(zhuǎn)化
都要新鮮制備感受態(tài)細(xì)胞。
3. 主要用于釀酒酵母 S. cerevisia 和 S. pombe，但能否用于其他酵母（如 C.
albicans、Pichia pastoris 等）不詳。
4. 高轉(zhuǎn)化效率可達(dá)到 0.2-1×106 個(gè)轉(zhuǎn)化子/ug 質(zhì)粒 DNA。
5. 得到的感受態(tài)細(xì)胞可以用各種線(xiàn)性或環(huán)狀酵母穿梭質(zhì)粒 DNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)化，例
如 YIp, YRp, YCp, YEp 和 YAC 等。
6. 可以用于酵母雙雜交、定點(diǎn)突變（Site－Directed Mutagenesis）、基因破
壞（Gene Disruption）、等位突變基因修復(fù)（Mutant Allele Recovery）
等實(shí)驗(yàn)。
7. 本試劑盒足夠處理 200 mL 酵母菌液，制備 40 管酵母感受態(tài)細(xì)胞。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 20 次塑料袋包裝
本產(chǎn)品 81201 100 mL
使用手冊(cè) 81201sc 1 份

自備試劑 滅菌水，SD 液體培養(yǎng)基（不含氨基酸的 0.67% Bacto Yeast Nitrogen Base，
2%葡萄糖），SD 固體培養(yǎng)基（在 SD 液體培養(yǎng)基中再加 2%瓊脂），YPD 液體培
養(yǎng)基（1% Bacto Yeast Extract, 2% Bacto Peptone, 2%葡萄糖），YPD 固體
培養(yǎng)基（在 YPD 液體培養(yǎng)基中再加 2%瓊脂）
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。
裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒使用方法 一：電感受態(tài)細(xì)胞的制備
說(shuō)明：按本方法制備 1 管酵母電感受態(tài)細(xì)胞就需要 OD600 達(dá)到 1.0 的新鮮酵母
培養(yǎng)液 5 mL，用戶(hù)需根據(jù)制備的酵母感受態(tài)細(xì)胞數(shù)量決定培養(yǎng)細(xì)胞的體積。下
面操作只是以 10 mL 酵母為例說(shuō)明。
1. 培養(yǎng) S.pombe 細(xì)胞：挑取新鮮單菌落（4℃放置不超過(guò) 3 周的也可以），接
種到 10 mL SD 液體培養(yǎng)基中。30℃搖晃培養(yǎng)，搖床速度 250rpm/分鐘，
直到 OD600 達(dá)到 1.0 左右（相當(dāng)于 1×107細(xì)胞/mL）。
2. 培養(yǎng) S.cerevisiae 細(xì)胞：挑取新鮮單菌落（4℃放置不超過(guò) 3 周的也可以），
接種到裝在 10 mL YPD 液體培養(yǎng)基中。30℃搖晃培養(yǎng)，搖床速度 250rpm/
分鐘，直到 OD600 達(dá)到 1.0 左右（相當(dāng)于 1×107細(xì)胞/mL）。
3. 冰上放置 15 分鐘。
4. 室溫 1600rpm 離心 5 min，棄上清。
5. 用冰浴的滅菌水洗滌 3 次。
6. 用 0.2 mL 冰浴的本產(chǎn)品重懸細(xì)胞。
7. 按每管 0.1 mL 分裝到 1.5-2 mL 的冷凍管中，直接放入-80℃冰箱待用。
注意：不能放在液氮中，否則將喪失電轉(zhuǎn)化能力。
二：電轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞
1. 將裝有 0.1 mL 感受態(tài)細(xì)胞的冷凍管從冰箱取出的、放置在 30℃水浴中快速
化凍（快速化凍的效果好于緩慢化凍）。
2. 用 1 mL 冰浴的本產(chǎn)品洗滌一次。
3. 加入 50 uL 冰浴的本產(chǎn)品重懸細(xì)胞。
4. 加入 1-30 ng 質(zhì)粒 DNA 并輕柔混勻。
5. 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的、距離為 0.2cm 的電擊杯中。
6. 按電擊儀的手冊(cè)設(shè)置電擊參數(shù)并進(jìn)行電擊處理，參考條件為：10kV/cm (對(duì)
0.2 cm 的電擊杯，則為 2 kV), 5 ms (25 ?F, 200?)（各廠家儀器的使用略
有不同，請(qǐng)嚴(yán)格按電擊儀廠家提供的手冊(cè)進(jìn)行操作）。
7. 電擊后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 1 mL 預(yù)冷的本產(chǎn)品中，輕柔混勻。
8. 取 0.2 mL 轉(zhuǎn)化細(xì)胞涂盤(pán)（S.pombe 細(xì)胞需涂盤(pán)在 SD 固體培養(yǎng)基上，
S.cerevisiae 細(xì)胞需涂盤(pán)在 YPD 固體培養(yǎng)基上），30℃培養(yǎng) 4-6 天。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒，裂殖酵母感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒。