大腸桿菌Tuner（DE3）化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是大腸桿菌 BL21（DE3）plysS 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA 的熱擊轉(zhuǎn)化。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)本產(chǎn)品，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107。該菌株帶有質(zhì)粒plysS，具有氯霉素抗性，此質(zhì)粒含有表達(dá) T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾 IPTG 誘導(dǎo)的表達(dá)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

大腸桿菌Tuner(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌 Origami B (DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于 DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)本產(chǎn)品，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107。本感受態(tài)細(xì)胞具有卡那霉素和四環(huán)素抗性。
菌株基因型為：F-ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10trxB (KanR,TetR)
規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 包裝
本產(chǎn)品 120520 0.1 mL×10
使用手冊(cè) 1 份

運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。
自備試劑 目的 DNA、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等
大腸桿菌Tuner(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞使用方法 1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μL，可以根據(jù)
實(shí)際情況分裝使用。
以下實(shí)驗(yàn)以 50 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量
的 DNA，通常 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液器
輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。
3. 42℃熱擊 45 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。
4. 每個(gè)離心管中加入 450 μL 無(wú)菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃
搖床，150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 固體
瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃直至液體被吸收，
倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。
注意：
1. 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；
若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μL 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較
少，可通過離心（4,000 rpm，2 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于
平板中。
2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再
涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 Origami B (DE3) plysS 感受態(tài)細(xì)胞（CAT#:130556）