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細胞篩選方法和步驟
閱讀:1466 發(fā)布時間:2021-6-21篩選步驟:
a.殺滅曲線的確定
1.將未轉染的細胞按每孔0.05million鋪入24孔板,孵育過夜,
2.第二天,除去24孔板中舊的培養(yǎng)基,
3.將含不同濃度嘌呤霉素(1ug/mL,2ug/mL,3ug/mL,4ug/mL,5 ug/mL,6ug/mL,7ug/mL)的新鮮培養(yǎng)基加入已鋪有細胞的24孔板,
4.每2天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,
5.每天觀察細胞的存活比例,
6.最小的嘌呤霉素使用濃度就是從嘌呤霉素篩選開始1-4d內殺死所有細胞的篩選濃度。
b.嘌呤霉素篩選轉染細胞
1.第一天,將轉染的細胞按每孔0.05million鋪入24孔板,孵育過夜
2.第二天,除去24孔板中舊的培養(yǎng)基,
3.加入含嘌呤霉素(2ug/mL)的篩選培養(yǎng)基,孵育,
4.每2天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,
5.每天觀察細胞的存活比例,
6.在同一時間點(2d)存活的細胞,即為轉染成功細胞,
7.對篩選后的細胞進行擴增。