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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
SPINK4抗體 | 50ul 100ul 200ul | Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. |
產(chǎn)品分類:抗體 / 一抗
英文名稱:SPINK4
中文名稱 胃腸肽SPINK4抗體
英文別名 Gastrointestinal peptide; ISK4_HUMAN; PEC 60; PEC60; Peptide PEC-60 homolog; Serine peptidase inhibitor Kazal type 4; Serine protease inhibitor Kazal-type 4; SPINK4.
交叉反應:Human
標記: Unconjugated
抗體來源: Rabbit
抗體類型: Polyclonal
免疫原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human SPINK4
蛋白細胞定位: 分泌型蛋白
純化方法: affinity purified by Protein A
亞型 IgG
性狀: Liquid
濃度: 1mg/ml
儲存液: 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件: Shipped at 4℃. Store at -20 °C for o
背景資料:SPINK4 is an 86 amino acid secreted protein containing one kazal-like domain, which has been suggested to play a role in central nervous system disorders associated with dopamine dysregulation. Expressed in the gastrointestinal tract, central nervous system, bone marrow and peripheral blood, SPINK4 is moderately expressed in spleen and is encoded by a e mapping to human chromosome 9p13.3. Human chromosome 9 houses over 900 es and comprises nearly 4% of the human ome. Hereditary hemorrhagic telangiectasia, which is characterized by harmful vascular defects, and Familial dysautonomia, are both associated with chromosome 9.
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏佐劑和弗氏不佐劑
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。
相關(guān)產(chǎn)品:
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抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
標記法:
直接標記法 | 間接標記法 |
抗體的準備:取提純的Ig溶液測定蛋白質(zhì)含量,置于三角燒瓶中加入生理鹽水和0.5mol/L pH9.5碳酸鹽緩沖液,冰槽中攪拌5~10min; 熒光素的準備:按每毫克蛋白質(zhì)加0.01~0.02mg的FITC計算,準確稱取后加入抗體溶液中; 標記:邊攪拌邊加入熒光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰庫繼續(xù)攪拌12~18h; 透析:結(jié)合完畢后,先將結(jié)合物以3000r/min離心20min,除去少量沉淀物后裝入透析袋中再置于pH8.0緩沖鹽的燒杯中透析過夜; 過柱:取透析過夜的標記物,過葡聚糖凝膠G-25或G-50柱,分離游 | 抗體的準備:0~4℃下,用0.01mol/L pH8.0 PBS將待標記的抗體蛋白溶液稀釋到濃度為30~40mg/ml,置于三角燒瓶內(nèi)放入冰槽中; 熒光素的準備:按每毫克蛋白質(zhì)加入0.01mg的熒光素稱取,溶解于等量的3%重碳酸鈉水溶液中;將抗體蛋白溶液與FITC溶液等量混合,在0~4℃中攪拌18~24h,充分攪勻; 透析或過柱層析。 |
實驗步驟:
① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。
② 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間(參考:30min)。
③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不時振蕩。
④ 取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
⑤ 立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度,一般可用“+"表示:
(-)無熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見;(++)熒光明亮;(+++ --++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++"以上,而各種對照顯示為(±)或(-),即可判定為陽性。
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