以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Caspase 1 活性檢測試劑盒 | Caspase 1 Activity Assay Kit | 20次|100次 | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中caspase 1酶活性或純化的caspase 1酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時(shí),除標(biāo)準(zhǔn)曲線外可以檢測20個(gè)樣品。 試劑盒組分: 裂解液——————8ml 檢測緩沖液——————8ml Ac-YVAD-pNA(2mM)———200μl pNA(10mM)——————200μl Caspase是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也稱interkeukin 1b conberting enzyme(ICE),有時(shí)被寫作caspase-1或caspase 1,是caspase家族中可以剪切IL-1b前體蛋白或IL-18前體產(chǎn)生相應(yīng)成熟的細(xì)胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1前體蛋白,產(chǎn)生20kD和10kD的片段,這兩個(gè)片段可以形成異源二聚體(heterodimer),并進(jìn)一步由兩個(gè)異源二聚體形成四聚體。Caspase 1可以通過剪切其凋亡Bcl-XL來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡,并通過其對一些細(xì)胞因子前體的剪切來調(diào)控相關(guān)免疫反應(yīng)。 本caspase 1活性檢測試劑盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA(acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 1的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。 試劑盒中提供了caspase 1催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA,可以作為定量caspase 1酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。 儲(chǔ)存條件:-20℃。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
同型半胱(Hcy)英文名稱:Hcy ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗體包裝1g
鐵調(diào)(Hepc)英文名稱:Hepc ELISA Kit雙調(diào)蛋白(結(jié)腸直腸源性生長因子)抗體包裝250mg
鐵蛋白(Ferritin)英文名稱:Ferritin ELISA Kit磷化通道蛋白2抗體包裝100g
鐵蛋白(FE)英文名稱:FE ELISA Kit粘附相關(guān)激抗體包裝25g
天門冬基轉(zhuǎn)移(AST)英文名稱:AST ELISA Kit磷化粘附相關(guān)激抗體包裝5g
天冬基轉(zhuǎn)移(AST)英文名稱:AST ELISA Kit磷化蛋白激B抗體包裝1g
糖原磷化同工MM(GP-MM)英文名稱:GP-MM ELISA Kit磷化通道蛋白2抗體包裝5g
糖原磷化同工II(GP-II)英文名稱:GP-II ELISA Kit磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝1g
糖原磷化同工BB(GP-BB)英文名稱:GP-BB ELISA Kit磷化蛋白激B抗體包裝1g
糖原合成激(GSK)英文名稱:GSK ELISA Kit磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝5g
糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)英文名稱:CDT ELISA Kit磷化活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體包裝1g
糖皮質(zhì)類固受體(GR)英文名稱:GR ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝5g
糖皮質(zhì)激受體β(GR-β)英文名稱:GR-β ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝5mg
糖皮質(zhì)激受體α(GR-α)英文名稱:GR-α ELISA Kit磷化蛋白激AKT1,2,3抗體包裝1g
糖類抗原199(CA199)英文名稱:CA199 ELISA Kit磷化蛋白激B抗體包裝1g
ANGEL1蛋白抗體胎蛋白(αFP)Ponatinib是一種有效的,可口服的多靶點(diǎn)激抑制劑,抑制Abl,PDGFRα,VEGFR2,F(xiàn)GFR1 和 Src 的 IC50 分別為0.37 nM,
Caspase 1 活性檢測試劑盒金龜子綠僵 四苯基氯化鏻α;β干擾素受體檢測試劑盒
牛型放線 2-氨基-4-氯代苯并噻唑α1抗胰蛋白酶檢測試劑盒
假桄榔葉點(diǎn)霉 3-氨基-3-(4-)酸α1酸性糖蛋白檢測試劑盒
厚壁芽孢桿 2-氟苯酸α1-微球蛋白檢測試劑盒
蘇云金芽胞桿蠟螟亞種 4,4'-(2-甲基-6-乙基苯)α2-HS糖蛋白檢測試劑盒
哈茨木霉 磺二甲基嘧啶鈉鹽α2巨球蛋白檢測試劑盒
釀酒酵母 1-溴-2-乙基苯α2抗纖溶酶檢測試劑盒
豌豆根瘤 2,4-二氯αL巖藻糖苷酶檢測試劑盒
斑玉蕈 2-溴苯基乙α-N-乙酰-半乳糖氨酶檢測試劑盒
地霉半乳糖酵母 芐磺酰氯α-氨基羥甲基惡唑酸檢測試劑盒
粘著劍 1-溴-2,6-二氯苯α淀粉酶檢測試劑盒
Acinetobacter genospecies 2-氟-3-甲基-5-硝基吡啶α-防御素檢測試劑盒
膠孢 三(三溴新戊基)磷酸酯α-輔肌動(dòng)蛋白4檢測試劑盒
紅球 D-(+)-二對甲氧基苯甲酰α甘露糖苷酶檢測試劑盒
松針散斑殼 2-氯-5-α干擾素檢測試劑盒