詳細(xì)介紹
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
20T | 1~3天 |
商品介紹:
保存條件:-20℃冰凍保存。 保存期:一年 工作原理: 在機(jī)體內(nèi)部隨時(shí)都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細(xì)胞的死亡,其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚,時(shí)間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活,細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與 DNA 斷點(diǎn)數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至 3’-OH 末端,DIG-dUTP 結(jié)合在 DNA 斷點(diǎn)部位,可以通過生物標(biāo)記的抗抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后,再結(jié)合熒光素 FITC或者過氧化物酶 POD 標(biāo)記的鏈酶親和素(SABC-FITC/SABC-POD)。FITC 在 490-495nm 激化,在 520-530nm 發(fā)射熒光,在熒光顯微鏡下呈明亮黃綠色。POD的在加入顯色底物 DAB 顯色后,凋亡的細(xì)胞核呈棕黃色。用戶根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,在不同切片上用兩套不同顯示系統(tǒng)觀察。 試劑盒內(nèi)容: 1.標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer)1ml 2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl 3.DIG-dUTP(×20)20μl 4.封閉液(Blocking Reagent)4ml 5.生物素化抗抗體(× 100)20μl 6.SABC-FITC(× 100)20μl 7.SABC-POD(× 100)20μl 8.Proteinase K(×200)50μl 9.抗體稀釋液 4ml 10.未染色陽性對照片 2 張。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
補(bǔ)體1抑制因子(C1INH)英文名稱:C1INH ELISA Kit9號染色體開放閱讀框86抗體包裝5g
補(bǔ)體1q(C1q)英文名稱:C1q ELISA Kit鈣粘附分子18抗體包裝25g
脫氫磷(PDP)英文名稱:PDP ELISA KitCD276抗體包裝5g
脫氫激同工4(PDK4)英文名稱:PDK4 ELISA Kit21號染色體開放閱讀框25抗體包裝1g
脫氫β(PDHβ)英文名稱:PDHβ ELISA Kit22號染色體開放閱讀框36抗體包裝5g
脫氫α(PDHα)英文名稱:PDHα ELISA Kit補(bǔ)體組分1q子成分樣蛋白1抗體包裝1g
羧化(PC)英文名稱:PC ELISA KitCD44抗體包裝25g
糖磷異構(gòu)1(TPI1)英文名稱:TPI1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框114抗體包裝5g
別孕烯(AP)英文名稱:AP ELISA KitCD8β鏈(CD8-β)抗體包裝100mg
表皮轉(zhuǎn)谷酰胺(TGM3)英文名稱:TGM3 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框1抗體包裝25g
表皮調(diào)節(jié)(EREG)英文名稱:EREG ELISA Kitγ晶狀體蛋白S/γS-crystallin抗體包裝5g
表皮生長因子受體2(EGFR2)英文名稱:EGFR2 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框72抗體包裝25g
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)英文名稱:SPD ELISA Kit鈣粘附分子10抗體包裝5g
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白A(SPA)英文名稱:SPA ELISA KitR Cadherin/CDH4包裝25g
表睪(ET)英文名稱:ET ELISA Kit大鼠細(xì)小病H-1株(H-1)抗體包裝5g
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR幽門螺旋菌IgG試劑盒乙酰蝙蝠葛蘇林堿;O-diacetyld
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品幽門螺旋桿菌IgM試劑盒一葉萩堿;Securinine
膠孢刺盤孢Colletotrichum│gloeosporioides 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR硬骨試劑盒異葒草; Homoorientin
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒IV(FITC+POD)纖維纖維微 甘氨酸銅風(fēng)疹病抗體Elisa
冷溫木拉克酵母 硅酸四鈉鹽吸血蟲抗體Elisa
斯氏土地桿 2-甲基-1,3-苯并惡唑-6-羧酸CD34分子Elisa
大腸埃希氏 雙(4-基苯基)甲腫瘤干標(biāo)記物Elisa
弗雷德里克斯堡假單胞 3-溴-2,6-二甲氧基吡啶Parkin蛋白Elisa
克魯斯假絲酵母 5''-溴-3,3''-二辛基-[2,2':5',2''-三噻吩]-5-甲維生BElisa
小殼焦孢屬 羥鈷金黃色葡萄球腸BElisa
釀酒酵母 3-氟-5-溴苯金黃色葡萄球腸CElisa
釀酒酵母 棕櫚酸異辛酯金黃色葡萄球腸EElisa
蠟狀芽孢桿 2,4-二氯煙前列腺H2Elisa
蘇云金芽孢桿 2-乙黃原酸基異丁酸超氧化物歧化Elisa
白僵 (1R,2R)-2-氨基環(huán)己鹽酸鹽二氫蝶啶還原Elisa
傳染性喉氣管炎病 (1S,2S)-2-氨基環(huán)己鹽酸鹽CD73分子Elisa
釀酒酵母 肉桂肟, mixed isomers7-脫氫膽固還原Elisa
矩圓黑盤孢 2-氨基-5-溴-4-甲基噻唑鹽酸鹽肝微粒體混合功能氧化Elisa