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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-21 12:33:04瀏覽次數(shù)：433
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X9659 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | Typan Blue Staining Cell Viability Assay Kit |
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性：
英文名稱：Typan Blue Staining Cell Viability Assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格：100T
發(fā)貨周期：1～3天
商品介紹：
本試劑盒各組分均以無菌形式提供，可直接用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。臺盼藍(lán)（Trypan Blue），一種偶氮、親水性酸性藍(lán)色染料，可透過死亡細(xì)胞和垂死細(xì)胞的細(xì)胞膜，將其染成藍(lán)色，而活細(xì)胞由于其細(xì)胞膜的完整性，可將臺盼藍(lán)排斥在外，因此，通過顏色的變化即可將活細(xì)胞（活細(xì)胞呈透明無色）和死細(xì)胞鑒別開來，基于此原理，本品廣泛用于細(xì)胞活性水平的常規(guī)評估。臺盼藍(lán)還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺盼藍(lán)與蛋白結(jié)合形成的復(fù)合物可發(fā)出紅色熒光。另外，臺盼藍(lán)（合適濃度）還常用來淬滅細(xì)胞表面的自熒光或者其他熒光信號。 使用方法 1）對于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，對其充分清洗后，加入適量細(xì)胞重懸液重懸細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液；對于貼壁細(xì)胞，先用胰酶消化細(xì)胞，再按照懸浮細(xì)胞的方法制備單細(xì)胞懸液。 2）取0.1ml單細(xì)胞懸液，按照1:1比例與0.1ml 0.4%臺盼藍(lán)染色液充分混勻，室溫染色3~10min。 【注】：因臺盼藍(lán)具有細(xì)胞毒性，染色時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致部分死細(xì)胞染色，干擾計(jì)數(shù)。通常染色3min即可。 3）取少量上述染色細(xì)胞加入，于顯微鏡低倍鏡下計(jì)數(shù)，分別計(jì)算著色細(xì)胞（即損傷細(xì)胞和死細(xì)胞）和總細(xì)胞。 【注1】：用移液槍加染色細(xì)胞時(shí)，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其*覆蓋住整個(gè)小室。不可過量加液或者不足量。 【注2】：1mm2方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)通?？刂圃?0-50 cells，當(dāng)細(xì)胞數(shù)超過200個(gè)，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。 4）按照以下公式來計(jì)算細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞百分比， a，計(jì)算每ml細(xì)胞數(shù)目：Cells/ml=1mm2大方格內(nèi)的平均細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×104；【注】：此時(shí)的稀釋倍數(shù)為：步驟2所取的單細(xì)胞懸液與臺盼藍(lán)染色液混合后的稀釋倍數(shù) b，總細(xì)胞數(shù)目：Total cells=（Cells/ml）×初制備單細(xì)胞懸液的總體積 c，細(xì)胞活力值：Viability（%）=（總細(xì)胞數(shù)-總著色細(xì)胞數(shù)）/總細(xì)胞數(shù)×100 【注】：通常情況，健康的對數(shù)期培養(yǎng)細(xì)胞，活細(xì)胞至少占到95%。 儲存條件：室溫，有效期2年 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)英文名稱：MCP2 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144A抗體包裝25g
單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)英文名稱：MCP1 ELISA Kit周期B3抗體包裝1g
單氧化A(MAOA)英文名稱：MAOA ELISA Kit羧肽X(M14家族2)抗體包裝25g
存活(Surv)英文名稱：Surv ELISA Kit上皮鈣粘附分子結(jié)合蛋白E7包裝5g
簇集蛋白(CLU)英文名稱：CLU ELISA Kit周期D結(jié)合蛋白1抗體包裝1g
促胰液(SCT)英文名稱：SCT ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白120抗體包裝5g
促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)英文名稱：TPPP ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白23抗體包裝1g
促泌(SCGN)英文名稱：SCGN ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白89抗體包裝25g
刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)英文名稱：HHIP ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白30抗體包裝5g
次磷核糖基轉(zhuǎn)移1(HPRT1)英文名稱：HPRT1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白40抗體包裝5mg
雌激受體β(ERβ)英文名稱：ERβ ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白114抗體包裝100g
雌激受體α(ERα)英文名稱：ERα ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白39抗體包裝25g
垂體腺苷環(huán)化激活肽(ADCYAP1)英文名稱：ADCYAP1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白34抗體包裝25g
穿孔1(PRF1)英文名稱：PRF1 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白75抗體包裝5g
成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)英文名稱：FGFR3 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白65抗體包裝25g
光硬皮馬勃Scleroderma│cepa Pers. 質(zhì)量規(guī)格：含量>98.5%，類白色粉末游離三狀腺原試劑盒鹽白屈菜紅堿;Chelerythrin
嗜鹽潮間帶桿菌Aestuariibacter│halophilus 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP31游離肉堿銀杏酚;Ginkgolic acids
豬鏈球菌Streptococcus│suis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品游離前列腺特異性抗原試劑盒野菊花內(nèi)酯;Yejunualactone
臺盼藍(lán)染色法細(xì)胞活力檢測試劑盒粟酒裂殖酵母 3-甲氧基-4-氯苯甲EB病早期抗原IgAElisa
鞘氨單胞 2-氯-5-甲氧基苯甲蓖麻抗體Elisa
蜂房哈夫尼 1-異基哌β-乙型溶血性鏈球Elisa
食酸屬（噬酸屬） 1-(四氫-2H-吡喃-4-基)乙酮弓形蟲Elisa
蘇云金芽孢桿 1-甲基-1h-咪唑-4-磺酰氯父系表達(dá)基因2Elisa
細(xì)交鏈孢霉 2,6-二氟苯膜結(jié)合型前列腺E合成1Elisa
產(chǎn)芽孢梭（生孢梭） 4-甲氧基-3-SCETINElisa
新疆糖單孢 2-羥基-3-硝基-5-氟吡啶角化生長因子2Elisa
葡萄穗霉 7-氮雜-2-羧酸20S蛋白體Elisa
球黑孢霉 5-氯-2-苯酚26S蛋白體Elisa
蠟狀芽孢桿 (R)-3-氟吡咯烷(HCL)HA tag標(biāo)簽Elisa
球形賴氨酸芽孢桿 (S)-(+)-3-氟吡咯烷鹽酸鹽系統(tǒng)性紅斑狼瘡Elisa
枇杷假尾孢 2,6-二氟甲酯沉默調(diào)節(jié)蛋白1Elisa
辣乳菇 5-氯-2,4-二氟苯磺酰氯組織蛋白FElisa
蠟狀芽孢桿 4-(三氟甲基)-2-巰基嘧啶膽紅氧化代謝物Elisa
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