以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
DAPI溶液(5mg/ml) | DAPI Solution | 5mg/ml×0.2ml | 1~3天 |
商品介紹:
本品DAPI是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比,對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。 DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。 DAPI的大激發(fā)波長為340nm,大發(fā)射波長為488nm;DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后,大激發(fā)波長為364nm,大發(fā)射波長為454nm。 本DAPI溶液用水配制,濃度為5mg/ml。用于細(xì)胞核染色時(shí),推薦的DAPI工作濃度為0.5-10μg/ml。 CAS:28718-90-3 分子式:C16H15N5·2HCl 分子量:350.25 儲(chǔ)存條件:-20℃避光,有效期一年。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
腦啡肽原B(PDYN)英文名稱:PDYN ELISA Kit乙脫氫2型抗體包裝5g
腦啡肽原A(PENK)英文名稱:PENK ELISA Kitγ-基丁脫氫抗體包裝1g
腦腸肽(Gehrelin)英文名稱:Gehrelin ELISA Kit衰老相關(guān)蛋白5抗體包裝25g
腦腸肽(BGP/Gehrelin)英文名稱:BGP/Gehrelin ELISA Kit磷化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質(zhì)/α-晶體蛋白b鏈抗體包裝5g
末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)英文名稱:TCC C5b-9 ELISA Kit釉基質(zhì)蛋白抗體包裝1g
膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)英文名稱:ANX-Ⅴ ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝25g
繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(AMH)英文名稱:AMH ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝5g
苗條受體(LR/Ob-R)英文名稱:LR/Ob-R ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝1g
免疫球蛋白M(IgM)英文名稱:IgM ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝5g
免疫球蛋白G4(IgG4)英文名稱:IgG4 ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝1g
免疫球蛋白G2(IgG2)英文名稱:IgG2 ELISA Kit磷化雄激受體抗體包裝5g
免疫球蛋白G1(IgG1)英文名稱:IgG1 ELISA Kit錨定蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白激ANKK1抗體包裝1g
免疫球蛋白G(IgG)英文名稱:IgG ELISA Kit磷化內(nèi)收蛋白抗體包裝25g
免疫球蛋白E(IgE)英文名稱:IgE ELISA Kit膜粘連蛋白11抗體包裝5g
免疫球蛋白D(IgD)英文名稱:IgD ELISA Kit膜粘連蛋白13抗體包裝100mg
肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體免疫球蛋白G(IgG)Torezolid (TR-701; tedizolid) is a novel oxazolidinone for gram-positive infecti
DAPI溶液(5mg/ml)黑木耳 N-甲基-D-脯氨補(bǔ)體因子Bb檢測試劑盒
黃桿 4-乙氧羰基-3-乙氧基補(bǔ)體因子D檢測試劑盒
枯草芽孢桿 1-氯乙基環(huán)己基碳酸酯補(bǔ)體因子H檢測試劑盒
檸檬形克勒克酵母 6-喹啉-2-酮不對稱二甲基精氨酸檢測試劑盒
球孢白僵 2-氯-3-三氟甲基-5-硝基吡啶層粘連蛋白檢測試劑盒
Rhizobium alkalisoli 2-羥基-5-硝基-3-三氟甲基吡啶叉頭框C2檢測試劑盒
產(chǎn)腸素大腸埃希氏 7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉鹽酸鹽叉頭型基因P3檢測試劑盒
產(chǎn)朊假絲酵母 4-溴酮腸三葉因子檢測試劑盒
蘇云金芽孢桿 3-甲酸甲腸脂肪酸結(jié)合蛋白檢測試劑盒
假單胞 四丁基氟氫銨超敏C蛋白檢測試劑盒
粉狀畢赤酵母 白屈菜酸超敏游離雌三檢測試劑盒
灰樹花G25 D-3-溴苯氨酸超氧化物歧化酶檢測試劑盒
葡萄牙鏈霉 N-Boc-5-甲氧基沉默調(diào)節(jié)蛋白1檢測試劑盒
谷糠乳桿 5-氨基間苯二甲酸二甲酯成骨生長肽檢測試劑盒
秀珍菇 10-(2,5-二羥基苯基)-10H-9-氧雜-10-磷雜菲-10-氧化物成熟BNP檢測試劑盒