公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱:Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:10T|20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細(xì)胞凋亡早期,細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V 進(jìn)行熒光素FITC 標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin V 作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細(xì)胞膜,但對凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞,PI 能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細(xì)胞區(qū)分開來。 本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測(不推薦用于檢測組織樣本)。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
降鈣原(PCT)英文名稱:PCT ELISA Kit淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體包裝250mg
降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)英文名稱:CGRP ELISA Kit淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體包裝1g
降鈣(CT)英文名稱:CT ELISA Kit轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體包裝25g
堿性磷(ALP)英文名稱:ALP ELISA Kit卵巢、胎盤、前列腺、蛋白22抗體包裝5g
堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF/FGF2)英文名稱:bFGF/FGF2 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白33B抗體包裝1g
堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)英文名稱:bFGF ELISA Kit載脂蛋白C3抗體包裝5g
狀腺抗體(TAb)英文名稱:TAb ELISA Kit凋亡增強(qiáng)核抗體包裝1g
狀腺(T4)英文名稱:T4 ELISA Kit染色體脆弱性相關(guān)基因抗體包裝1g
狀腺球蛋白(TG)英文名稱:TG ELISA Kit磷化蛋白激B抗體包裝25g
狀腺過氧化物(TPO)英文名稱:TPO ELISA Kit銅轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)β鏈抗體包裝5g
狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)英文名稱:PTHrP ELISA Kit?;铣杉易?抗體包裝1g
狀旁腺激(PTH)英文名稱:PTH ELISA Kit性磷樣蛋白2抗體包裝25g
種胎兒球蛋白/胎蛋白(AFP)英文名稱:AFP ELISA KitAHNAK核蛋白2抗體包裝5g
基化(Methylase)英文名稱:Methylase ELISA Kit二磷腺苷核糖基化因子6相互作用蛋白抗體包裝1g
己糖激(HK)英文名稱:HK ELISA Kitp53誘導(dǎo)蛋白5抗體包裝250mg
磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體催乳(PRL)Amlodipine磺鹽是長效鈣離子通道抑制劑。
Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒芽孢桿 4-嗎啉苯酸芳香烴受體檢測試劑盒
大腸桿 三山崳精非受體型蛋白酪氨酸激酶檢測試劑盒
卡爾斯巴德唯鹽 3,4,5-氧基苯非?;疓hrelin檢測試劑盒
單孢共頭霉 4-Thioanisolemagnesium Bromide肥大類胰蛋白酶檢測試劑盒
奇異球 4-羥基-2-甲基吡啶肥大羧肽酶檢測試劑盒
黑曲霉 4-硝基芐鹽酸鹽肥胖抑制素檢測試劑盒
紅菇屬 2,3,-二氯-5-氟吡啶肥素檢測試劑盒
泡盛曲霉 2-氨基-4-甲酸甲酯肺癌抗原檢測試劑盒
多主葡萄殼 6-甲基-3-氨基噠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A檢測試劑盒
梭 9-(3-溴苯基)-9H-咔唑肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A2檢測試劑盒
楊生盾殼霉 2-氯-3-溴-6-甲基吡啶肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B檢測試劑盒
枯草芽胞桿 2-羥基-4-甲肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C檢測試劑盒
嗜熱脂肪地球芽胞桿 1-丁基-3-甲基咪唑氯化鋁鹽肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D檢測試劑盒
枯草芽胞桿 4-氯-6-甲基喹啉肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子檢測試劑盒
白靈側(cè)耳 (S)-1-[(乙?;被?甲基]-2-氯乙基乙酸酯肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子檢測試劑盒