商品介紹:
本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細胞凋亡檢測(不推薦用于檢測組織樣本)。在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V 被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素(EGFP、FITC)標記,以標記了的Annexin V 作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。與FITC 的綠色熒光信號相比,EGFP 的綠色熒光信號具有信號強,不易淬滅,穩(wěn)定性高等優(yōu)點,故本試劑盒采用EGFP作為熒光標記探針。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但對凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI 能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱:Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:10T|20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
金屬硫蛋白2(MT-2)英文名稱:MT-2 ELISA Kit去整合樣金屬蛋白12包裝250mg
金屬硫蛋白1(MT-1)英文名稱:MT-1 ELISA Kit磷化乙酰羧化1ACCα抗體包裝5g
解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)英文名稱:ADAM9 ELISA Kit膜粘連蛋白2受體抗體包裝100ml
解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)英文名稱:ADAM8 ELISA Kit晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體抗體包裝1g
解脲脲原體抗體(UU-Ab)英文名稱:UU-Ab ELISA KitADCK5蛋白抗體包裝5g
睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)英文名稱:CNTF ELISA Kit艾滋病病復(fù)制結(jié)合蛋白抗體包裝1g
結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)英文名稱:Hpt/HP ELISA KitAFP4b蛋白抗體包裝5g
結(jié)締組織生長因子(CTGF)英文名稱:CTGF ELISA KitHIV-1病復(fù)制結(jié)合蛋白2抗體包裝100g
結(jié)蛋白(Des)英文名稱:Des ELISA Kit伴侶蛋白bc1同源復(fù)合體抗體包裝25g
窖蛋白Caveolin1(Cav-1)英文名稱:Cav-1 ELISA Kit心肌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域1抗體包裝5g
角化細胞生長因子(KGF/FGF-7)英文名稱:KGF/FGF-7 ELISA Kit抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝25g
角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)英文名稱:AR ELISA Kit抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體包裝5g
膠原II(Collagenase II)英文名稱:Collagenase II ELISA Kit抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝1g
膠原I(Collagenase I)英文名稱:Collagenase I ELISA Kit抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體包裝5g
膠原吡啶交聯(lián)(PYD)英文名稱:PYD ELISA Kit雌二抗體包裝1g
磷化通道蛋白2抗體促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)Oxiracetam, a cyclic derivative of gamma-aminobutyric acid (GABA), is used as a
Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒中國臺灣根霉 3-基一磷酸腺苷檢測試劑盒
禽腺病Ⅶ型 N-丁基吡啶雙(三氟甲磺酰)亞鹽二磷酸腺苷檢測試劑盒
木賊鐮孢 O-(叔丁基)-D-絲氨酸二氫嘧啶脫氫酶檢測試劑盒
富養(yǎng)羅爾斯通氏 1-BOC-4-甲酰肼二氫嘧啶脫氫酶檢測試劑盒
芽孢桿 5-氯乙基四氮唑二氫乳清酸脫氫酶檢測試劑盒
孢吸水鏈霉 2,4-二氯噻吩[2,3-D]嘧啶二肽基肽酶Ⅳ檢測試劑盒
荷葉蘑 2-氯-3-硝基-6-苯基吡啶二氧化硫檢測試劑盒
多欄純潔桿 癸二反應(yīng)蛋白7A域檢測試劑盒
蘇云金芽孢桿庫爾斯塔克亞種 1-叔丁基-3-氨基氮雜環(huán)丁烷泛連接蛋白1檢測試劑盒
Arthrobacter 2-基-泛素檢測試劑盒
弗雷德里克斯堡假單胞 4-基肉桂酸泛素A52殘留核糖體蛋白融合產(chǎn)物1檢測試劑盒
孢小克銀漢霉 5-氨基-3-溴-2-甲基吡啶泛素C末端水解酶L1檢測試劑盒
球孢白僵 4-氟-3-羥基苯泛素蛋白D檢測試劑盒
暗灰鏈霉 5-氯-2-氟苯酚泛素連接酶檢測試劑盒
釀酒酵母 2-(2-1H-咪唑基)吡啶芳香化酶檢測試劑盒