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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-21 10:46:45瀏覽次數(shù)：266
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X9556 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | MTS?Cell?Proliferation?And?Cytotoxicity?Detection? |
商品介紹：
本試劑盒是一種采用Annexin V-FITC與PI雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。 細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內(nèi)面，在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)不能通過完整的活細胞，但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募毎M行染色， 因此通常將Annexin V與PI配合染色， 以區(qū)別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。 操作步驟： 1、細胞樣品的準(zhǔn)備： a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。 b．對于懸浮細胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細胞，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。 2、用去離子水按 1:3 稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。 3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細胞，調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。 4、取 100μl 的細胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。 5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。 6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS，流式細胞儀(FACS)分析。 儲存條件：2～8℃，避光保存 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1～3天 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)英文名稱：PCNA ELISA Kit肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體包裝5ml
抗(AT)英文名稱：AT ELISA Kit蛋白激A2抗體包裝1g
抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)英文名稱：PA-IgG/M/A ELISA Kit血管緊張Ⅱ受體2抗體包裝5g
抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)英文名稱：ACA-IgM ELISA KitASH1蛋白抗體包裝100g
抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)英文名稱：ACA-IgG ELISA Kit芳香乙酰脫乙?；鶚拥鞍?抗體包裝25g
抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)英文名稱：ACA-IgA ELISA Kit血管內(nèi)皮遷移蛋白抗體包裝5g
抗心肌抗體(AMA)英文名稱：AMA ELISA Kit糖還原相關(guān)蛋白質(zhì)抗體包裝100g
抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm)英文名稱：snRNP/Sm ELISA Kit膽汁結(jié)合蛋白DDH2抗體包裝25g
抗線粒體抗體(AMA)英文名稱：AMA ELISA Kit血管生成樣蛋白3抗體包裝500g
抗透明帶抗體IgG(aZP-IgG)英文名稱：aZP-IgG ELISA Kit甘油酯激線粒體抗體包裝50MG
抗透明帶抗體(aZP)英文名稱：aZP ELISA Kit磷化內(nèi)收蛋白a1抗體包裝25ml
抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)英文名稱：dsDNA ELISA Kit自噬體ATG16L2蛋白抗體包裝1g
抗平滑肌抗體(ASMA)英文名稱：ASMA ELISA Kit性磷抗體包裝100g
抗凝血受體(ATR)英文名稱：ATR ELISA Kit性磷抗體包裝25g
抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)英文名稱：AT-Ⅲ ELISA Kit光激A相互作用蛋白1抗體包裝25g
粘附相關(guān)激抗體B-淋巴激活抗原B7-2(LAB7-2)Palbociclib hydrochloride是高選擇性的 CDK4/6 抑制劑，IC50 分別為11 nM 和 16 nM。
Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒大腸桿 5-氟-2-甲氧基苯甲蛋白酪氨酸磷酸酶檢測試劑盒
鮭色沉積物桿狀 Fmoc-Glu(EDANS)-OtBu蛋白酪氨酸磷酸酶檢測試劑盒
籃狀屬 5-甲氧基苯并[B]噻吩-2-酸蛋白酪氨酸磷酸酶1B檢測試劑盒
平菇 2-氨基-5-甲基噻吩-3-羧酸甲酯蛋白磷酸酶檢測試劑盒
三葉草根瘤 N-Boc-3-溴甲基蛋白酶激活受體4檢測試劑盒
毛柄(金針菇) 3-氟-4-甲蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶檢測試劑盒
異常漢遜酵母異常變種 2-氯-6-基異硫酸酯刀豆素A檢測試劑盒
土曲霉 1,3-二氯-2-苯低半乳糖化IgA檢測試劑盒
釀酒酵母 4-(2-氨基乙基)哌-1-甲酸叔丁酯低分子肝素檢測試劑盒
凍土毛霉 2-甲基-3-噻吩甲酸低密度脂蛋白檢測試劑盒
硬炭團 4-N-Cbz-2-羥甲基哌低密度脂蛋白膽固檢測試劑盒
泛養(yǎng)副球 4-甲苯磺酰低密度脂蛋白受體檢測試劑盒
菲爾德斯半島擬諾卡氏 1,2,3,4-四氫-1-萘甲酸低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1檢測試劑盒
米曲霉 2-溴苯并[9,10]菲低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4檢測試劑盒
還原硫酸鹽互營桿* 2-異基苯低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5檢測試劑盒
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