商品介紹:
ISRIB(trans-isomer)是高效的PERK抑制劑,IC50值為5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1597403-47-8 純度:98.0% 分子式:C??H??Cl?N?O? 分子量:451.34 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
葡萄生擬莖點霉菌肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體Human NUP50 ELISA Kit山梨脫氫(SDH)ELISA Kit
芽孢桿菌屬磷化原癌基因c-Met相關(guān)酪激抗體Human NUP205 ELISA Kit沙眼衣原體抗原(CT)ELISA Kit
釀酒酵母絲裂原活化蛋白激13抗體Human NUDT6 ELISA Kit沙眼衣原體抗體(CT)ELISA Kit
釀酒酵母多纖毛蛋白抗體Human NUP53 ELISA Kit沙眼衣原體蛋白樣活性因子(CPAF)ELISA Kit
枯草芽孢桿菌肌管相關(guān)蛋白8抗體Human NUMBL ELISA Kit沙眼衣原體(CT)ELISA Kit
吉氏芽孢桿菌巨噬甘露糖受體2抗體Human PYGB(Glycogen phosphorylase, brain form) ELISA Kit沙漠猬因子(DHH)ELISA Kit
不動桿菌周期G1的相互作用蛋白抗體Human NUDT8 ELISA Kit殺傷凝集樣受體(KLR)ELISA Kit
芽胞桿菌主導(dǎo)控制樣蛋白3抗體Human NUP107 ELISA Kit殺傷免疫球蛋白樣受體(KIR)ELISA Kit
枯草芽孢桿菌斯氏亞種絲裂原活化蛋白激MKK3抗體Human NUP133 ELISA Kit殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)ELISA Kit
脫葉鏈霉菌MYSM1抗體Human NUP160 ELISA Kit殺菌肽B(CecB)ELISA Kit
新月彎孢單羧轉(zhuǎn)運蛋白-1抗體Human F11(Coagulation factor XI) ELISA Kit殺菌肽(cecropin)ELISA Kit
巴斯德畢赤酵母微管相關(guān)蛋白1A抗體Human NUP153 ELISA Kit色上皮衍生因子(PEDF)ELISA Kit
漢遜德巴利酵母中期因子/肝結(jié)合生長因子抗體Human NUP50 ELISA Kit色酰tRNA合成(WARS)ELISA Kit
米曲霉鹽皮質(zhì)激受體抗體Human NUP205 ELISA Kit色羥化(TPH)ELISA Kit
類馬鏈球菌促黑激α抗體Human NUDT6 ELISA Kit三角形四肽重復(fù)蛋白1(TTC1/TPR1)ELISA Kit
桃中田殼小圓孢菌Myc基因相關(guān)X因子抗體Human NUP53 ELISA Kit狀腺原(T3)ELISA Kit
: =ATCC53103資源名稱: 鼠李糖乳桿菌 質(zhì)量規(guī)格:螯合劑五味子乙
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:螯合劑五味子酯
銅綠假單胞菌Pseudomonas│aeruginosa 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)五味子酯乙
PERK抑制劑(ISRIB trans-isomer)CLEC5A/MDL1 C型凝集結(jié)構(gòu)域家族5成員A抗體庚酯 ≥99%, FCC, FG
LAMP-3/DC-LAMP/CD208 CD208抗體庚酯 AR,98.5%
DC-SIGN/CD209 間粘附分子非整合蛋白3抗體辛酯 Standard for GC,>99%(GC)
DC-SIGNR/CD299 CD299抗體辛酯 99%
DEC-205/CD205/Ly75 LY75抗體辛酯 ≥99%, FCC, FG
DCP 異常凝血原/脫-γ-羧凝血原抗體丁酯 GCS,≥99.5% (GC)
Doublecortin 雙皮質(zhì)抗體丁酯 99%
Phospho-Doublecortin (Ser297) 化雙皮質(zhì)抗體丁酯 ≥99%, FCC