公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
TUNEL檢測陽性對(duì)照制備試劑盒 | Positive control preparation kit for TUNEL detection | 10次 | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒可以用于TUNEL檢測陽性對(duì)照的制備,制備后的陽性對(duì)照可以用于一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(YT135)的熒光,也可以用于顯色法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(YT137)的顯色檢測。DNase I可以剪切基因組DNA,使基因組DNA產(chǎn)生片段化(fragmentation)?;蚪M被片段化的細(xì)胞在用TUNEL法檢查時(shí)會(huì)呈陽性染色。本試劑盒足夠制備10個(gè)陽性對(duì)照。 試劑盒組份: DNase I—————————10μl Reaction Buffer(10X)——200μl 注意事項(xiàng):需自備用于TUNEL檢測的組織切片、或培養(yǎng)細(xì)胞的片子。需自備TUNEL檢測試劑盒。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
心鈉肽(ANP)英文名稱:ANP ELISA Kitα2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1包裝1g
心肌營養(yǎng)1(CT-1)英文名稱:CT-1 ELISA Kit凋亡相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)英文名稱:cTn-Ⅰ ELISA Kit肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體包裝1g
心肌肌鈣蛋白(cTn-Ⅰ)英文名稱:cTn-Ⅰ ELISA KitATP結(jié)合蛋白家族7抗體包裝25g
小扁豆結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)英文名稱:AFP-L3 ELISA KitASCL2蛋白抗體包裝5g
小扁豆結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)英文名稱:AFP-L2 ELISA Kit磷化脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體包裝1g
小扁豆結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)英文名稱:AFP-L1 ELISA Kit磷化活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝100g
腺苷高半胱(AHCY)英文名稱:AHCY ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝25g
腺病毒IgG抗體(ADV IgG)英文名稱:ADV IgG ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝500g
纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)英文名稱:TAFI ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝25g
纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)英文名稱:PAI-1 ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝5g
纖溶原激活劑抑制物(PAI-1)英文名稱:PAI-1 ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝10MG
纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)英文名稱:PAP ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝1mg
纖連蛋白(FN)英文名稱:FN ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子5抗體包裝5mg
細(xì)胞周期D3(Cyclin-D3)英文名稱:Cyclin-D3 ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子6β抗體包裝5mg
AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白28抗體白介4(IL4)Osimertinib (AZD9291) is an oral, irreversible, and mutant-selective EGFR inhibi
TUNEL檢測陽性對(duì)照制備試劑盒Bacillus 6-羥基-2-萘磺酸鈉N末端C型利鈉肽前體檢測試劑盒
嗜鹽堿堿芽孢桿 4-氟-3-甲N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶檢測試劑盒
球孢白僵 2,3-二溴吡啶OX40 Ligand檢測試劑盒
柔嫩艾美耳球蟲 甲基3-甲硫酯P21 WAF1;CIP1檢測試劑盒
平菇 L-纈氨酸叔丁酯鹽酸鹽P21蛋白檢測試劑盒
金針菇 3,4,5-三氟苯p53自身抗體檢測試劑盒
釀酒酵母 4-基苯酸Periostin檢測試劑盒
尖孢鐮刀 2,4-二甲氧基苯酸前顆粒體蛋白檢測試劑盒
曲霉 化亞銅有凸素1檢測試劑盒
*樺褐孔 2-[2-(1-哌基)乙氧基]乙磷酸化tau—181蛋白檢測試劑盒
狀鞘氨單胞 6-甲基噠-3[2H]-酮PTEN;MMAC1檢測試劑盒
三孢布拉氏霉 乙基二酸二乙酯P糖蛋白;滲透性糖蛋白檢測試劑盒
鏈霉 愈創(chuàng)木酚磺酸P物質(zhì)檢測試劑盒
磚紅鐮刀 D-二甲酯P物質(zhì)受體檢測試劑盒
嗜熱鏈球 2-甲基二苯甲酮P選擇素檢測試劑盒