以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織caspase-6 檢測(cè)。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。Caspase-6 是級(jí)聯(lián)酶的下游分子,被Caspase-9 激活后,激活下游Larmin A 的活性,導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)發(fā)生皺縮及細(xì)胞膜滲漏。Caspase-6 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒有活性;但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段時(shí)則被激活。Caspase-6 分光光度法檢測(cè)試劑盒就是將caspase-6 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán),當(dāng)該底物被caspase-6 剪切后,發(fā)色基團(tuán)即游離出來,可通過酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)(λ=405nm 或400nm)測(cè)定其吸光值,可考察caspase-6 的活化程度。 注意事項(xiàng) 1. Caspase-6 Substrate 避光保存及使用。 2. 對(duì)某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-6 活化的機(jī)制,這種情況時(shí)利用本試劑盒檢測(cè)Caspase-6 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號(hào)通路。 3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個(gè)或新鮮組織50~100mg,以便能達(dá)到測(cè)定需要的100~200μg 蛋白的要求,因?yàn)镃aspase-6 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測(cè)定的OD 值偏低,可通過增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
補(bǔ)體蛋白3(C3)英文名稱:C3 ELISA Kit血管生成相關(guān)蛋白5包裝5g
補(bǔ)體C4(C4)英文名稱:C4 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域53抗體包裝1g
補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)英文名稱:C1INH ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域54抗體包裝1g
波形蛋白(VIM)英文名稱:VIM ELISA Kiβ5抗體包裝1g
脫氫E1(PDH E1)英文名稱:PDH E1 ELISA Kit肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
激M2型同工(M2-PK)英文名稱:M2-PK ELISA Kit腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體抗體包裝10MG
激(PK)英文名稱:PK ELISA Kit肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白1抗體包裝1g
二單酰(malonyl CoA)英文名稱:malonyl CoA ELISA Kitβ淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體(X11β)包裝5g
二醛(MDA)英文名稱:MDA ELISA Kit乙酰結(jié)合蛋白抗體包裝100g
轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)(ALT/GPT)英文名稱:ALT/GPT ELISA Kit磷化分裂周期蛋白16抗體包裝25g
轉(zhuǎn)(ALT)英文名稱:ALT ELISA Kit白血病相關(guān)蛋白AHI1抗體包裝1g
表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)英文名稱:EGFR ELISA Kit活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷脫抗體包裝5g
表皮生長(zhǎng)因子(EGF)英文名稱:EGF ELISA Kit三磷腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白9抗體包裝1g
吡啶交聯(lián)物(PY)英文名稱:PY ELISA KitADP核糖基化因子3抗體包裝100g
(LPA)英文名稱:LPA ELISA Kit含酰tRNA合成結(jié)構(gòu)域1抗體包裝25g
通道蛋白-2抗體骨成型蛋白2(BMP2)Idelalisib (CAL-101; GS-1101) 是一種口服有效的高選擇性 p110δ 抑制劑,IC50 為 2.5 nM,比 p110δ 和其他 P
Caspase 6分光光度法檢測(cè)試劑盒產(chǎn)色葡萄球 1,5-二氨基-2-甲基戊烷堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒
變異鹽單胞 2-氯-4-羥基-5-氟嘧啶降鈣素檢測(cè)試劑盒
裂褶 N,N-二甲基四氟乙降鈣素基因相關(guān)肽檢測(cè)試劑盒
沙壤土桿 1-BOC-4-氯劑盒
東方伊薩酵母 N-[1-[5-O-[二(4-甲氧基苯基)苯甲基]-2-脫氧-2-氟-BETA-D-阿拉伯呋喃糖基]降脂素檢測(cè)試劑盒
蘇云金芽胞桿 2-[(2,4-二)甲基]-1H-苯并咪唑膠原酶I檢測(cè)試劑盒
大腸埃希氏 依法韋侖膠原酶II檢測(cè)試劑盒
果生鏈核盤 4-溴-3,6-噠二酮膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子檢測(cè)試劑盒
Nitriliruptor 1-Boc-4-酸角蛋白,II型骨架1b檢測(cè)試劑盒
葡萄座腔 2-(1H-咪唑-1-基)乙鹽酸鹽角化生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒
馬賽 7-氨基-1,2,3,4-四氫喹啉窖蛋白Caveolin1檢測(cè)試劑盒
谷氨酸棒桿 6,7-二氫-6-巰基-5H-吡唑并[1,2-α][1,2,4]三氮唑氯化物接觸蛋白1檢測(cè)試劑盒
短波單胞 爾它培南鈉結(jié)腸癌抗原檢測(cè)試劑盒
草菇 4-溴煙酸結(jié)蛋白檢測(cè)試劑盒
釀酒酵母 3-吡唑羧酸甲酯結(jié)締組織生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒