產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Annexin V-APC細胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱:Annexin V-APC Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:10T|20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V 被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V 進行熒光素APC 標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin V 作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發(fā)生。\ 本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細胞凋亡檢測(不推薦用于檢測組織樣本)。 |
細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)英文名稱:Tn-Ⅰ ELISA Kit酪轉(zhuǎn)抗體包裝5g
肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)英文名稱:cTnⅠ ELISA Kit抗利尿激/血管升壓/加壓/血管加壓抗體包裝25g
饑餓激(GHRL)英文名稱:GHRL ELISA KitATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體包裝5g
活性氧(ROS)英文名稱:ROS ELISA Kit糖還原抗體包裝1g
活化B(ACV-B)英文名稱:ACV-B ELISA Kit人血清白蛋白抗體包裝5g
活化A(ACV-A)英文名稱:ACV-A ELISA Kit抗體(采用活疫苗制備)包裝10MG
活化蛋白C(APC)英文名稱:APC ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體包裝5g
黃體生成釋放激(LHRH)英文名稱:LHRH ELISA Kit腺苷激-1抗體包裝1g
黃體生成(LH)英文名稱:LH ELISA Kit纖維狀肌動蛋白抗體包裝250mg
環(huán)磷腺苷(cAMP)英文名稱:cAMP ELISA Kit聚集蛋白抗體包裝1g
環(huán)磷鳥苷(cGMP)英文名稱:cGMP ELISA Kit調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體包裝1g
環(huán)加氧2(COX-2)英文名稱:COX-2 ELISA Kit調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體包裝5g
環(huán)孢A(CsA)英文名稱:CsA ELISA Kit間變型淋巴瘤激抗體包裝25g
花生四烯5脂氧合(Alox5)英文名稱:Alox5 ELISA Kitα-基酰基消旋抗體包裝5g
花生四烯(AA)英文名稱:AA ELISA Kit膜粘連蛋白A1抗體包裝10mg
精tRNA的蛋白轉(zhuǎn)移1抗體載脂蛋白B(APOB)Dasatinib (BMS-354825)是 Bcr-Abl 和 Src 家族酪激抑制劑,抑制Abl, Src,c-Kit和c-KitD816V 的 I
Annexin V-APC細胞凋亡檢測試劑盒釀酒酵母 2-(炔基)二酸二乙酯甘油三酯檢測試劑盒
黃溶鏈霉 4-氯嘧啶鹽酸鹽肝癌衍生生長因子檢測試劑盒
大豆慢生根瘤 三(1,3-二苯基-1,3-二酮基)(1,10-鄰二氮雜菲銪(Ⅲ)肝配蛋白B3檢測試劑盒
食砜節(jié)桿 4-乙?;交酋B雀嗡剌o因子Ⅱ檢測試劑盒
雷公藤糖多孢 3-氨甲酸甲酯鹽酸鹽肝素結(jié)合性表皮生長因子檢測試劑盒
黑根霉 4,5,6-三氯嘧啶肝癌結(jié)合蛋白TD26檢測試劑盒
大豆慢生根瘤 Fmoc-D-4-氟苯氨酸肝核因子4α檢測試劑盒
副豬嗜血桿 2,4-二(二氟甲基)苯肝生長因子檢測試劑盒
草木樨中華根瘤 四丁基單醋酸鏻肝生長因子受體檢測試劑盒
克雷伯氏桿 1-金剛烷肝脂肪酸結(jié)合蛋白檢測試劑盒
彎頭曲霉 3-甲氧基-4-氨基苯甲肝脂肪酸結(jié)合蛋白檢測試劑盒
靈芝 五氮化三磷肝脂酶檢測試劑盒
產(chǎn)紫青霉 2-(4-溴苯基)-1H-咪唑干擾素調(diào)節(jié)因子檢測試劑盒
東方伊薩酵母 雨蛙素干擾素調(diào)節(jié)因子4檢測試劑盒
大豆慢生根瘤 2,5-二氯吡啶-3-甲干擾素調(diào)節(jié)因子5檢測試劑盒
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)