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詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
1mL | 1～3天 |
商品介紹：
Hoechst 33258，也稱bisBenzimide H 33258或HOE 33258，是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。Hoechst 33258染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33258也常用于普通的細胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。Hoechst 33258的大激發(fā)波長為346nm，大發(fā)射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發(fā)波長為352nm，大發(fā)射波長為461nm。本Hoechst 33258染色液可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色，也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。 使用說明： 使用前用生理鹽水或PBS將Hoechst 33258染色液稀釋100倍，即為工作液。 1. 對于固定的細胞或組織： a. 對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進行Hoechst 33258染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續(xù)的Hoechst 33258染色。 b. 對于貼壁細胞或組織切片，加入少量Hoechst 33258工作液，覆蓋住樣品即可;對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品3倍體積的工作液，混勻。室溫放置3-5分鐘。 c. 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。 d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發(fā)生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。 2. 對于活細胞或組織： a. 加入適當量Hoechst 33258工作液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對于六孔板一個孔需加入1mL工作液，對于96孔板一個孔需加入100μL工作液。 b. 在適宜于細胞培養(yǎng)的溫度下培養(yǎng)20-30分鐘。棄染色液，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進行熒光檢測。 儲存條件：-20℃避光，有效期一年。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
Toll樣受體4(TLR4)英文名稱：TLR4 ELISA Kit表面趨化因子受體1抗體包裝1g
Toll樣受體3(TLR3)英文名稱：TLR3 ELISA Kit表面趨化因子受體2抗體包裝100g
Toll樣受體2(TLR2)英文名稱：TLR2 ELISA Kit表面趨化因子受體3抗體包裝25g
Thy1細胞表面抗原(Thy1)英文名稱：Thy1 ELISA Kit表面趨化因子受體4抗體包裝500g
TGFβ誘導早期應答基因1(TIEG1)英文名稱：TIEG1 ELISA Kit活化半胱蛋白蛋白-3抗體包裝25ml
TATA框結合蛋白關聯(lián)因子12(TAF12)英文名稱：TAF12 ELISA Kit抗Ⅵ型膠原抗體包裝5ml
SRC/FGR/YES相關FYN癌基因(FYN)英文名稱：FYN ELISA Kit半胱蛋白8抗體包裝25g
Smad同源物7(Smad7)英文名稱：Smad7 ELISA Kit信號轉導蛋白亞基8抗體包裝5g
Smad同源物3(Smad3)英文名稱：Smad3 ELISA Kit表面趨化因子受體10抗體包裝1g
Smad同源物2(Smad2)英文名稱：Smad2 ELISA Kit轉鐵蛋白受體抗體包裝5g
Smad同源物1(Smad1)英文名稱：Smad1 ELISA Kit鈣粘蛋白相關的神經(jīng)受體2抗體包裝1g
Slit同源物3(Slit3)英文名稱：Slit3 ELISA Kit周期檢測點激1抗體包裝25g
Slit同源物2(Slit2)英文名稱：Slit2 ELISA Kit鈣粘蛋白相關的神經(jīng)受體1抗體包裝5g
Slit同源物1(Slit1)英文名稱：Slit1 ELISA Kit尾側型同源轉錄因子2/3抗體包裝1g
Sideroflexin1蛋白(SFXN1)英文名稱：SFXN1 ELISA Kit周期H抗體包裝5g
白色鏈霉菌Streptomyces│albus 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品異質性胞核核糖核蛋白A1試劑盒亞麻;Gamma linolenic
香菇Lentinula│edodes 質量規(guī)格：>98%,國產(chǎn)美侖異質性胞核核糖核蛋白A0試劑盒野漆樹苷;Rhoifolin
ATCC43308資源名稱: 鰻弧菌 質量規(guī)格：>98%,異質核糖核蛋白Q試劑盒葉黃制菌;Xanthatin
Hoechst 33258染色液藤黃微球 鹽酸阿洛司瓊琥珀酸脫氫Elisa
土生哈薩克斯坦酵母 1-BOC-吡咯烷-3-甲酰類嗜TⅠ型病Elisa
短波單胞 1-Boc-3-吡咯烷甲酸甲酯類T白血病病抗體Elisa
凍土毛霉 2,6-二溴-4,8-雙[(2-乙基己基)氧基]-苯并[1,2-B:4,5-B']二噻吩α1受體自身抗體Elisa
柑橘莖點 4-甲氧基-7-氮雜半胱氨酸Elisa
變幻青霉 2-哌甲酸甲酯相關蛋白A抗體Elisa
紅根須腹 4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶 N-氧化物幽門螺旋桿抗體Elisa
康寧木霉 2-乙酰氧基-2,4-二氟苯乙酮葡萄糖Elisa
總狀毛霉 N,N’-二-（2-辛基十二烷基）-2,3,6,7-四溴-1,4,5,8-萘四羧酸二酰乳酸Elisa
蟲草屬 3-叔丁氧羰基氨基-1-甲酸叔丁酯蛋白激C結合蛋白1Elisa
四川散斑殼 9,10-二基蒽內臟脂肪特異性絲氨酸蛋白抑制劑Elisa
馬賽 對氯甲酸叔丁酯血管緊張轉化Elisa
白地霉 4-辛氧基苯酸端粒Elisa
糙皮側耳 5-溴-3-(三氟甲基)-2-基吡啶膳食纖維Elisa
釀酒酵母 1-BOC-哌-2-甲酸膜聯(lián)蛋白-VElisa
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