產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Caspase 4 活性檢測試劑盒
英文名稱:Caspase 4 Activity Assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20次|100次
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
本試劑盒是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中caspase 4酶活性或純化的caspase 4酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時(shí),除標(biāo)準(zhǔn)曲線外可以檢測20個樣品。 Caspase是一個在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 4有時(shí)被寫作caspase-4或caspase 4,可以和Apaf-1相互作用并參與細(xì)胞色素導(dǎo)致的caspase 3激活。Caspase 4也可以和caspase 14相互作用。 本Caspase 4活性檢測試劑盒是基于caspase 4可以催化底物Ac-LEVD-pNA(acetyl-Leu-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 4的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。 試劑盒中提供了caspase 4催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA,可以作為定量caspase 4酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。 試劑盒組分: 裂解液——————8ml 檢測緩沖液——————8ml Ac-LEVD-pNA(2mM)———200μl pNA(10mM)——————200μl 儲存條件:-20℃。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
通道蛋白0(AQP-0)英文名稱:AQP-0 ELISA Kit早老穩(wěn)定因子樣蛋白/γ分泌組件蛋白APH1抗體包裝1g
雙氫睪(DHT)英文名稱:DHT ELISA Kit磷化蛋白激AKT1抗體包裝25g
瘦(Leptin)英文名稱:Leptin ELISA Kit磷化蛋白激AKT1抗體包裝5g
瘦(LEP)英文名稱:LEP ELISA KitASH1L蛋白抗體包裝1g
嗜性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)英文名稱:ECP ELISA Kitα2C-AR腎上腺能受體抗體包裝100g
嗜性粒細(xì)胞過氧化物(EPO)英文名稱:EPO ELISA Kit中心體蛋白AZI1抗體包裝25g
嗜粒細(xì)胞趨化因子(ECF)英文名稱:ECF ELISA Kitα蛋白激3抗體(心?。┌b5g
嗜粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 3(Eotaxin 3)英文名稱:Eotaxin 3 ELISA Kit表皮型脂氧合3抗體(魚鱗病相關(guān)蛋白)包裝1g
嗜粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)英文名稱:Eotaxin 2/CCL24 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域28抗體包裝250mg
嗜粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)英文名稱:Eotaxin 1/CCL11 ELISA Kit淋巴相關(guān)AF4樣蛋白抗體包裝5g
嗜環(huán)蛋白/親環(huán)A(CyPA)英文名稱:CyPA ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體包裝250g
視黃結(jié)合蛋白4(RBP-4)英文名稱:RBP-4 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13A抗體包裝500g
視黃結(jié)合蛋白(RBP)英文名稱:RBP ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體包裝1G
生長抑(SS)英文名稱:SS ELISA Kit錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白1A抗體包裝250MG
生長激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)英文名稱:GHRP-Ghrelin ELISA Kit脂肪特定轉(zhuǎn)錄因子2抗體包裝1g
特異性錨樣蛋白1抗體血小板因子4(PF4)Otenabant 是一種有效的,選擇性的 cannabinoid receptor CB1 拮抗劑,Ki 值為 0.7 nM,對其選擇性是對 CB2 的 10
Caspase 4 活性檢測試劑盒天藍(lán)色鏈霉 (S)-(-)-N-芐基-α-甲基芐β內(nèi)酰酶檢測試劑盒
三葉草根瘤 2-氨基-6-甲氧基苯并噻唑β葡萄糖酸苷酶檢測試劑盒
解幾丁質(zhì)纖維單胞 3-苯甲酰烯酸乙酯, 主要為反式β羥丁酸檢測試劑盒
尖孢鐮孢 (S)-(+)-1-環(huán)己基乙β-微管蛋白檢測試劑盒
多主葡萄殼 鄰三氟乙酮β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1檢測試劑盒
豬丹絲 L-亮氨酸芐酯對甲苯磺酸鹽β血小板球蛋白;β血栓環(huán)蛋白檢測試劑盒
木霉 2-氯-4-羥基吡啶β血小板球蛋白;β血栓環(huán)蛋白檢測試劑盒
果生鏈核盤 1-甲基-2-羥甲基-1氫-咪唑γ氨基丁酸檢測試劑盒
芽孢桿屬 2-氯-3-溴-5-甲基吡啶γ干擾素檢測試劑盒
腸膜明串珠 2-氨基-3-溴-5-甲基吡啶γ干擾素誘導(dǎo)單核因子檢測試劑盒
豇豆慢生根瘤 2-氯-5-甲基噻吩γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16檢測試劑盒
爪哇擬青霉 2-氯嘧啶γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶檢測試劑盒
多量毛霉 N-芐基甘氨酸γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶檢測試劑盒
孟氏假單胞 4-乙氧基-1,1,1-三氟-3--2-酮γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒
長雙歧桿 1-溴-2,6-二甲氧基苯δ氨基乙酰酸脫水酶檢測試劑盒
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)