詳細(xì)介紹
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
20T | 1~3天 |
商品介紹:
保存條件:-20℃冰凍保存。 保存期:一年 工作原理: 在機(jī)體內(nèi)部隨時(shí)都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細(xì)胞的死亡,其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚,時(shí)間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活,細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與DNA斷點(diǎn)數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至3’-OH 末端,DIG-dUTP 結(jié)合在DNA斷點(diǎn)部位,可以通過生物素化抗抗體(Anti-DIG-Biotin)和 SABC-AP反應(yīng)后,加入顯色底物 BCIP/NBT予以顯示。凋亡的細(xì)胞核呈紫藍(lán)色,從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細(xì)胞。 試劑盒內(nèi)容: 1.標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer)1ml 2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl 3.DIG-dUTP(×20)20μl 4.封閉液(Blocking Reagent)4ml 5.生物素化抗抗體(×100)20μl 6..SABC-AP(×100)20μl 7.Proteinase K(×200)50μl 8.BCIP/NBT 顯色劑(×20)0.2ml 9.抗體稀釋液4ml |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
白細(xì)胞介24(IL24)英文名稱:IL24 ELISA Kit12號染色體開放閱讀框42抗體包裝100g
白細(xì)胞激活黏附因子(ALCAM)英文名稱:ALCAM ELISA Kit11號染色體開放閱讀框46抗體包裝25g
白細(xì)胞彈性蛋白抑制因子(LEI)英文名稱:LEI ELISA Kit11號染色體開放閱讀框67抗體包裝500g
白三烯A4解(LTA4H)英文名稱:LTA4H ELISA Kit11號染色體開放閱讀框77抗體包裝5g
白介9(IL9)英文名稱:IL9 ELISA Kit11號染色體開放閱讀框16抗體包裝25g
白介8受體β(IL8Rβ)英文名稱:IL8Rβ ELISA Kit11號染色體開放閱讀框21抗體包裝5g
白介8受體α(IL8Rα)英文名稱:IL8Rα ELISA Kit11號染色體開放閱讀框24抗體包裝1g
白介7(IL7)英文名稱:IL7 ELISA Kit11號染色體開放閱讀框53抗體包裝500mg
白介6受體(IL6R)英文名稱:IL6R ELISA Kit11號染色體開放閱讀框57抗體包裝1g
白介6(IL6)英文名稱:IL6 ELISA Kit11號染色體開放閱讀框65抗體包裝25g
白介5受體α(IL5Rα)英文名稱:IL5Rα ELISA Kit11號染色體開放閱讀框71抗體包裝5g
白介5(IL5)英文名稱:IL5 ELISA Kit11號染色體開放閱讀框74抗體包裝100g
白介4(IL4)英文名稱:IL4 ELISA Kit12號染色體開放閱讀框4抗體包裝25g
白介35(IL35)英文名稱:IL35 ELISA Kit12號染色體開放閱讀框24抗體包裝1g
白介34(IL34)英文名稱:IL34 ELISA Kit環(huán)核苷門控陽離子通道蛋白CNG-1β抗體包裝5g
白葉枯病菌Xanthomonas│oryzae pv. oryzae 質(zhì)量規(guī)格:>99%試劑盒鹽去氫駱駝蓬堿;Harmine Hyd
藤黃微球菌Micrococcus│luteus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR音猬因子N端試劑盒異佛手柑內(nèi)酯 ;Isobergapten
: 1197資源名稱: 福氏志賀氏菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品音猬因子試劑盒右旋四氫巴馬汀 ; D-Tetrahyd
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒Ⅱ(AP)枯草芽孢桿 N-BOC-環(huán)谷氨酰Elisa
微小桿 超氧化物歧化1Elisa
釀酒酵母 4-溴-1-甲基-1H-1,2,3-噻唑鈣離子Elisa
蟻巢傘屬 5-溴-2-氯-6-甲基吡啶巨泌乳Elisa
金灰青霉 4-N-CBZ-氨甲基AFB1-DNA加合物Elisa
露濕漆斑 雙硬脂酸甘油酯甲胎蛋白1Elisa
根瘤 單硬脂酸酯血脂Elisa
淺綠氣球 5-氯吡啶-2-羧酸甲酯恢復(fù)蛋白Elisa
小青霉 (2R,3S)-3-苯基異絲氨酸鹽酸鹽鈣Elisa
枯草芽孢桿 1(或2)-甲基萘磷Elisa
松杉靈芝 3-氯-4-(吡啶-3-基)-1,2,5-噻二唑白介33受體Elisa
尖孢鐮刀棉花?;?/span> 2--5-NSMCE2Elisa
梨頭霉(+) 2-溴-5-溴甲基噻唑谷氨酸鹽Elisa
凸臍儒孢 2-三氟甲基-4-氯吡啶磷脂酸Elisa
古布爾班克氏屬 6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸軟脂酸Elisa