產(chǎn)品屬性:
中文名稱:細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒V(POD)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
保存條件:-20℃冰凍保存一年。 工作原理: 在機(jī)體內(nèi)部隨時(shí)都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來(lái)觀察細(xì)胞的死亡,其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚,時(shí)間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活 ,細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與 DNA 斷點(diǎn)數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標(biāo)記的 dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至 3’-OH 末端,DIG-dUTP 結(jié)合在 DNA 斷點(diǎn)部位,可以通過(guò)生物標(biāo)記的抗抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后,再結(jié)合鏈酶親和素-過(guò)氧化物酶(SABC),然后加入顯色底物 DAB 予以顯示。凋亡的細(xì)包核呈黃色,從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細(xì)胞。 試劑盒內(nèi)容: 1.標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer)5ml 2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)100μl 3.DIG-dUTP(×20)100μl 4.封閉液(Blocking Reagent)20ml 5.生物素化抗抗體(×100)100μl 6.SABC(×100)100μl 7.Proteinase K(×200)250μl 8.抗體稀釋液 20ml |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
酚磺基轉(zhuǎn)移(PST)英文名稱:PST ELISA Kit22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框9抗體包裝1g
胞外超氧化物歧化(SOD3)英文名稱:SOD3 ELISA Kit腫瘤高表達(dá)周期相關(guān)蛋白抗體包裝25g
半乳糖凝集9(GAL9)英文名稱:GAL9 ELISA Kit9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框117抗體包裝5g
半乳糖凝集7(GAL7)英文名稱:GAL7 ELISA Kit6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框120抗體包裝1g
半乳糖苷β(GLβ)英文名稱:GLβ ELISA Kit補(bǔ)體C1qα鏈多肽抗體包裝25g
半乳糖苷α(GLα)英文名稱:GLα ELISA Kit補(bǔ)體C1qγ鏈多肽抗體包裝5g
半乳凝8(GAL8)英文名稱:GAL8 ELISA Kit鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性絲蛋白激抗體包裝1g
半乳凝6(GAL6)英文名稱:GAL6 ELISA Kit老年癡呆相關(guān)類鈣粘蛋白CS2抗體包裝5g
半乳凝4(GAL4)英文名稱:GAL4 ELISA Kit質(zhì)多聚腺苷結(jié)合蛋白3抗體包裝1g
半乳凝2(GAL2)英文名稱:GAL2 ELISA KitComplexin I/復(fù)合1抗體包裝5g
半乳凝12(GAL12)英文名稱:GAL12 ELISA KitComplexin II/復(fù)合2抗體包裝1g
半胱豐富血管生成誘導(dǎo)因子61(CYR61)英文名稱:CYR61 ELISA Kit轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBPγ抗體包裝25g
半胱蛋白抑制劑3(CST3)英文名稱:CST3 ELISA Kit質(zhì)連接蛋白2抗體包裝5g
白細(xì)胞衍生趨化因子2(LECT2)英文名稱:LECT2 ELISA KitCD20抗體包裝100g
白細(xì)胞衍生趨化因子1(LECT1)英文名稱:LECT1 ELISA Kit12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框40抗體包裝500g
: AS3.800資源名稱: 米曲霉 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品印度猬因子試劑盒蕓苔內(nèi)酯;Brassinolide
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,一合物,BR,可用于培養(yǎng)隱熱蛋白試劑盒原薯蕷皂苷;Protodioscin
長(zhǎng)棒孢Camposporium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品2,3-雙加氧試劑盒乙酰黃芪皂苷I;Acetytastrag
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒V(POD)硬水黃桿 1,13-十三烷二流腦A型抗體Elisa
中型艾美耳球蟲(chóng) 乙酸烯酯腎損傷分子Elisa
平菇 2-乙基-(5或6)-甲基吡腸道病71型抗體Elisa
粘質(zhì)沙雷氏 N-乙基正丁骨成型蛋白5Elisa
球孢白僵 4-溴-2,5-二氟苯Caspase-1p20Elisa
假蜜環(huán)(亮) 2-哌甲酸艱難梭Elisa
1B2A3 2-氨基-3-硝基-5-溴-6-氯吡啶同源盒轉(zhuǎn)錄因子8抗體Elisa
黃薄芝 2-氯甲基咪唑啉鹽酸鹽沉默調(diào)節(jié)蛋白2Elisa
大腸桿 1-溴-2,5-二甲氧基-4-補(bǔ)體蛋白9Elisa
銅綠假單胞(綠膿桿) 6-肼基煙酸食欲AElisa
考克氏 二水合氨甲嘌呤狀瘤病Elisa
解脂假絲酵母解脂變種 2-三氟甲基-4-羧酸乙酯噻唑一氧化碳Elisa
釀酒酵母 2,3,5-三氟組織多肽特異性抗原Elisa
黃赭色鏈霉 2-甲氧基-4-(三氟甲氧)苯甲狀瘤病IgG抗體Elisa
釀酒酵母 鹽酸雷莫司瓊雄Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)