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轉化細胞遷移實驗注意事項
閱讀:566 發(fā)布時間:2018-3-7轉化細胞遷移實驗的注意事項
(1)根據待測細胞體積大小選擇合適孔徑的ThinCert。常用的為8.0-μm孔徑
(如AGS細胞),如果細胞體積較大可以考慮用10-μm孔徑;
(2)根據待測細胞遷移能力強弱調整細胞數和遷移時間。常規(guī)24-well
ThinCert接種細胞數約為2≈5×104/well,遷移時間12≈36小時;
(3)由于Greiner公司的24-Transwell內含24個獨立的ThinCert,為了避免
操作污染,每次實驗可預先另準備一塊24孔普通培養(yǎng)板(Greiner);
(4)如果細胞遷移能力較弱,下室液體可用3T3細胞無血清培養(yǎng)24小時獲得的
上清加50μg/ml FN(Fibronectin),具體可查閱相關文獻;
(5)細胞懸液加入膜中央,盡量保證液面水平;
(6)固定染色擦洗時動作小心,避免擦去膜底面的細胞。但一定要充分擦凈膜
表面上未遷移的細胞,以免影響讀數。尤其是膜周邊上可用細牙簽或小鑷
子纏上濕棉花擦洗,但要小心避免將膜戳破;
(7)Chamber和膜上都無法標記,操作時應小心避免混淆實驗組和對照組;
(8)充分晾干,避免殘留水分導致鏡下聚焦不一致。
細胞侵襲實驗(cell invasion assay)
轉化細胞實驗材料
(1)Matrigel (BD 5mg/ml),-20℃保存
(2)其余材料同遷移實驗
Cloprostenol Sodium 氯前列烯醇鈉標準品 55028-72-3 400mg
Levocarnitine 左卡尼汀標準品 541-15-1 400mg
Etodolac 依托度酸標準品 41340-25-4 400mg
Carbidopa 卡比多巴標準品 38821-49-7 400mg
Climbazole 苯咪丁酮標準品 38083-17-9 400mg
Zidovudine 齊多夫定標準品 30516-87-1 400mg
Cefazolin 頭孢唑林鈉標準品 25953-19-9 400mg
Cephalexin 頭孢氨芐標準品 23325-78-2 400mg
Mafenide Acetate 醋酸磺胺米隆標準品 13009-99-9 400mg
Octisalate (Octyl Salicylate) 水楊酸乙基己酯標準品 118-60-5 400mg
Tilmicosin 替米考星標準品 108050-54-0 400mg
Ioxilan 碘昔蘭標準品 107793-72-6 400mg
轉化細胞