蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報告。可按客戶要求提供含純化標(biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Phosphoinositide-3-Kinase Class 3 (PIK3C3)

Vps34; Phosphatidylinositol 3-kinase p100 subunit; Phosphatidylinositol 3-kinase catalytic subunit type 3

型號：GOY-01D2168

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細(xì)胞定位：：n/a

預(yù)測分子量：32.9kDa

實際分子量：33kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Tyr631~Trp885 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點：6.6

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

X-連鎖蛋白激酶(PRKX)重組蛋白英文名稱：Recombinant Protein Kinase, X-Linked (PRKX)PKX1; cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit PRKX物種：Rat，大鼠

脫氧胸苷酸激酶(DTYMK)重組蛋白英文名稱：Recombinant Deoxythymidylate Kinase (DTYMK)CDC8; TMPK; TYMK; Thymidylate Kinase; dTMP Kinase物種：Mouse，小鼠

基質(zhì)金屬15(MMP15)重組蛋白英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 15 (MMP15)SMCP-2; MTMMP2; MT2-MMP; Membrane-Inserted; Membrane-type matrix metalloproteinase 2; Membrane-type-2 matrix metalloproteinase物種：Pig

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

鏈霉菌 Streptomyces sp.NRK(大鼠腎細(xì)胞)

D-(-)-泛酰內(nèi)酯  質(zhì)量規(guī)格：>99% D-(-)-Pantolactone

 人膀胱上皮細(xì)胞培養(yǎng)基嗜桿菌 Lactobacillus acidophilus

鹽丁咯地爾  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR Buflomedil HCl

 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae人結(jié)腸春新堿耐藥株

雄二 質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BR 4-Androstene-3,17-dione

 RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞大豆慢生根瘤菌

鹽丁咯地爾(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 Buflomedil HCl

 平菇 Pleurotus sp.釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

雄二（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99% 4-Androstene-3,17-dione

 Ampicillin(100mg/ml,1000X)鬼傘屬 Bradyrhizobium vigna

赤芝A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97% Lucidenic acid A

 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae蘇云金芽胞桿菌庫爾斯塔克亞種 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki

維生素E琥珀酯;D-α-生育酚琥珀酯 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR Vitamin E succinate

 黃綠綠僵菌小孢變種 Metarhizium flavoviride var. minus大鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞培養(yǎng)基

伊沙匹隆 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR Ixabepilone (Azaepothilone B; BMS 247550)

磷酸肌醇-3-激酶3(PIK3C3)重組蛋白人50T H5N1熒光定量PCR檢測試劑盒（不含反轉(zhuǎn)錄） H5N1 Bird Flu Realtime PCR Kit 低溫運輸，-20℃保存

小鼠蛋白聚糖4(PRG4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

利茲不動桿菌培養(yǎng)基 Leeds Acinetobacter Medium 250g

雞L苯丙解氨(PAL)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

兔子膠原I(Collagenase I)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

1瓶 SK-N-BE(2)細(xì)胞株 SK-N-BE(2) 低溫運輸和保存

0.1%煌綠  1ml*20

人抗組織轉(zhuǎn)谷(tTG)抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)免疫試劑盒

250mg α- 環(huán)狀糊精 α-Cyclodextrin 室溫干燥保存

1瓶 LOVO細(xì)胞株 LOVO 低溫運輸和保存