詳細(xì)介紹
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本PCR試劑盒帶有Taq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上樣緩沖液,自備模板和引物即可進(jìn)行PCR反應(yīng),適合用于普通的PCR或RT-PCR定性或定量檢測,也可以用于不太長的的DNA片段的克隆。 Taq DNA Polymerase是一種來源于嗜熱菌Thermus aquaticus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶,95℃孵育時的半衰期大于40分鐘。Taq酶的分子量為94kDa。Taq酶可以催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性,有非常低的5'至3'外切酶活性。由于Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性,因此在DNA聚合過程中相當(dāng)于核苷酸轉(zhuǎn)移酶的作用,終會導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的3'末端會產(chǎn)生3'-dA overhangs,即產(chǎn)生帶一個A的3'粘端。本Taq DNA Polymerase為重組酶,通過大腸桿菌表達(dá)純化獲得,和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。 保存:-20℃ |
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Universal PCR Kit with Taq | 20μL×400次|20μL×2000次 | GOY-F10283 |
DNA提取流程圖:
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
人單胺氧化酶(MAO)ELISAKit Timosaponin B-II 136656-07-0 中文名:知母皂苷B-II 分子式:C45H76O19
人補(bǔ)體因子4(C4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human C4 (Compleme Compone 4) ELISA Kit 3,6'-Disinapoylsucrose 中文名:3,6'- 二芥子?;崽?/span> 分子式:C34H42O19 度:98.0%
人表皮轉(zhuǎn)谷酰胺酶(TGM3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human TGM3 (ansglaminase 3, Epidermal) ELISA Kit 3-[4-[(2-Chloro-5-iodophenyl)methyl]phenoxy]tetrahydro-furan 915095-94-2 中文名: 分子式:C17H16ClIO2
人白介素27(IL-27)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human IL-27 (Ierleukin 27) ELISA Kit 3-[2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)-3-quinolinyl-2-propenal 中文名: 分子式:C21H16FNO 度:98.0%
人α2巨球蛋白elisa試劑盒 人α2巨球蛋白試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 人α2巨球蛋白試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人α2巨球蛋白試劑盒、人α2巨球蛋白elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 5-Amino-1-(2-hydroxyethyl)pyrazole 中文名: 分子式:C5H9N3O
雷公藤內(nèi)酯甲(標(biāo)準(zhǔn)品) Wilforlide A 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱RatAngiogeninELISAKit大鼠血管生長素(Angiogenin)規(guī)格:96T/48T
連翹酯苷E(標(biāo)準(zhǔn)品) Forsythoside E 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 果菜比色法定量檢測試劑盒20
羅通定/左旋延胡索乙素/左旋四氫巴馬汀(標(biāo)準(zhǔn)品) Rotundine/ L-Tetrahydropalmatine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 ELISAKitNOS人合成酶規(guī)格:48T/96T
表沒食子兒茶素沒食子酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品) EGCG, (-)-Epigallocatechin gallate/Green Tea Extract 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒 ,英文名: MMP-7 ELISA Kit
去氧膽酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Deoxycholic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA檢測試劑盒RatCrosslaps,CrELISAKit 96T/48T
鈣黃綠素乙酰甲酯 Calcein-AM 質(zhì)量規(guī)格:>95%,美國進(jìn)口原裝 人敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒 Human high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit
(標(biāo)準(zhǔn)品) Nicotinamide 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99.5%,標(biāo)準(zhǔn)品 Ratthioredoxieductase,xRELISAKit大鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
雪膽素甲(標(biāo)準(zhǔn)品) cucurbitacins 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 LAMBDA噬菌體DNA分離試劑盒10
5-羥色胺酸(標(biāo)準(zhǔn)品) 5-Hydroxytryptophan(5-HTP) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 PlaVitaminD,VDELISA試劑盒植物D(VD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
5-羥色胺酸(5-HTP) 5-Hydroxytryptophan 質(zhì)量規(guī)格:>98%,混旋 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA 試劑盒
通用型PCR試劑盒組織蘋果酸酶(malic enzyme)活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞蘋果酸酶(Malic enzyme)活性比色法定量檢測試劑盒
胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine γ-lyase;CGL)活性比色法定量檢測試劑盒
植物胱硫醚-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性熒光定量檢測試劑盒
真菌/酵母胱硫醚-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性熒光定量檢測試劑盒
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。