詳細介紹
DNA提取流程圖:
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
dNTP Solution,10mM | 0.5mL | GOY-F10271 |
產(chǎn)品詳細介紹:
本產(chǎn)品是dATP、dTTP、dGTP、dCTP四種核苷酸的混合液,每種核苷酸的濃度為10mM,純度在98%以上(HPLC檢測),不含DNA內切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染,可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA測序、DNA探針標記等反應。使用濃度根據(jù)具體的反應決定,請參考相關手冊。 儲存條件:低溫運輸和-20℃保存、有效期一年。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3Gelisa試劑盒 人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒、人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。 2-Chloro-1-(5'-(prop-1-ynyl)-2,2'-bithiophen-5-yl)ethanol 中文名: 分子式:C13H11ClOS2
人絲切蛋白1(CFL1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human CFL1(Cofilin 1, Non-Muscle) ELISA Kit 2-Aminofluorene 中文名:2-氨基芴 分子式:C13H11N
人瘦素受體(LEPR)ELISAKit Tiagabine 中文名:鹽酸噻加賓 分子式:C20H26ClNO2S2
人瘦素 (Leptin) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 α-Spinasterone 23455-44-9 中文名: 分子式:C29H46O
人嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)ELISAKit 2-Cyano-N-[4-(Trifluoromethyl)Phenyl]Acetamide 24522-30-3 中文名: 分子式:C10H7F3N2O
奎寧單鹽酸鹽二水合物 Quinine dihydrate 質量規(guī)格:>99% 英文名稱Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)規(guī)格:96T/48T
1-甲基-1,2,4-三唑 1-METHYL-1,2,4-TRIAZOLE 質量規(guī)格:>98% 寡核苷酸探針同位素法RNA北方雜交*試劑盒5
甲啶鉑,吡鉑 Picoplatin 質量規(guī)格:>99%,BR ELISAKitIGF-1人胰島素樣生長因子1規(guī)格:48T/96T
4-硝基芐瞇鹽酸鹽 4-NitrobenziMidaMide HCl 質量規(guī)格:>97% 小鼠激活素AB(ACVAB)ELISA試劑盒 ,英文名: ACVAB ELISA Kit
脲,尿素 Urea 質量規(guī)格:AR 人硫酸角質素(KS)ELISA檢測試劑盒Humankeratansulfate,KSELISAKit 96T/48T
脫氫諾龍醋酸酯 Dehydronandrolon 質量規(guī)格:>96% 大鼠腺苷三0酸結合盒轉運體A1(ABCA1)試劑盒 Rat ATP-binding Cassette anspoer A1,ABCA1 ELISA Kit
延胡索酸/富馬酸/ 反丁烯二酸 Fumaric acid 質量規(guī)格:AR,99% 英文名稱Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)規(guī)格:96T/48T
甲磺酸達氟 Danofloxacin mesylate 質量規(guī)格:>98%,BR 光鏡樣品固著液(10%Formalin固著液)50毫升
甲磺酸達氟(標準品) Danofloxacin mesylate 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品 ELISAKitISR-β人胰島素受體β規(guī)格:48T/96T
海藻酸鈣 Calcium Alginate 質量規(guī)格:AR,99% 小鼠激活素A(ACVA)ELISA試劑盒 ,英文名: ACVA ELISA Kit
dNTP溶液(10mM)組織環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性比色法定量檢測試劑盒
細胞環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性比色法定量檢測試劑盒
體液環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性比色法定量檢測試劑盒
組織環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性比色法定量檢測試劑盒
細胞環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性比色法定量檢測試劑盒
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數(shù))