詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖:
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Formamide,PCR Grade | 5mL | GOY-F10264 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本產(chǎn)品為PCR級的甲酰胺,其可以促進(jìn)某些引物、模板退火,降低帶有二級結(jié)構(gòu)的DNA的變性溫度,是一種常用的PCR增強(qiáng)劑。 儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
人血小板反應(yīng)蛋白2(TSP-2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human TSP-2 (Thrombospondin-2) ELISA Kit 2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one 中文名: 分子式:C5H6N2OS
人血小板反應(yīng)蛋白1(TSP-1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human TSP-1 (Thrombospondin-1) ELISA Kit 2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one 中文名: 分子式:C5H6N2OS 度:98.0%
人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human TM (Thrombomodulin) ELISA Kit 3-[2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)-3-quinolinyl-2-propenal 148901-68-2 中文名: 分子式:C21H16FNO
人血栓調(diào)節(jié)蛋白 英文名稱: thrombomodulin 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: TM Rivaroxaban 366789-02-8 中文名: 分子式:C19H18ClN3O5S
人血漿抗凝蛋白S(PS)ELISAKit 2-C-Methyl-D-erythrono-1,4-lactone 中文名: 分子式:C5H8O4 度:98.0%
馬西替坦;ACT064992 Macitentan 質(zhì)量規(guī)格:>99%,內(nèi)皮素(ET)受體拮抗劑 phytohaemagglinin,PHAELISA試劑盒植物血凝素(PHA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組蛋白去乙酰化酶抑制劑(M 344) M344 質(zhì)量規(guī)格:>98%,HDAC抑制劑 小鼠甲基CpG結(jié)合蛋白2(MECP2)ELISA試劑盒 ,英文名: MECP2 ELISA Kit
2-硝基咪唑 2-Nitroimidazole 質(zhì)量規(guī)格:>98%, 人核糖核酸酶(RNASE)ELISA檢測試劑盒Humaibonuclease,RNASEELISAKit 96T/48T
4-(三氟甲基)-1H-咪唑 4-(Trifluoromethyl)-1H-imidazole 質(zhì)量規(guī)格:>98% 大鼠心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)試劑盒 Rat hea fatty acid binding protein,h-FABP ELISA Kit
2-甲基-4-三氟甲基咪唑 2-Methyl-4-trifluoromethylimidazole 質(zhì)量規(guī)格:>97% 英文名稱RatniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠合成酶(NOS)規(guī)格:96T/48T
2-氨基咪唑硫酸鹽 2-Aminoimidazole hemisulfate 質(zhì)量規(guī)格:>98% 寡核苷酸探針非同位素HRP-DAB顯色法DNA斑點(diǎn)雜交*試劑盒5
奧當(dāng)卡替(MK-0822) Odanacatib;MK0822 質(zhì)量規(guī)格:>98%,cathepsin K抑制劑 ELISAKitIAA人胰島素自身抗體規(guī)格:48T/96T
4-硝基兒茶酚 4-NITROCATECHOL 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98.0% ,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠己糖激酶1(HK1)ELISA試劑盒 ,英文名: HK1 ELISA Kit
4-硝基兒茶酚 4-NITROCATECHOL 質(zhì)量規(guī)格:>98.0% ,進(jìn)口分裝 人喋呤(MTX)ELISA檢測試劑盒Humanmethoexate,MTXELISAKit 96T/48T
曲格列酮 Troglitazone(CS-045) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 大鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)試劑盒 Rat cardioophln 1,CT-1 ELISA Kit
PCR級甲酰胺組織乙醛脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞乙醛脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒
血液乙脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒
組織乙脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞乙脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))