詳細(xì)介紹
即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL成分產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL成分產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預(yù)計(jì)長度的 PCR 產(chǎn)物。
pCMV6-AC-IRES-GFP-Puro(pCMV6ACIRESGFPPuro)
pcos5EMBL
pDB.His.TRX
pDRf1-GW(pDRf1GW)
pECFP-Nuc(pECFPNuc)(60908-2553)
pESC-LEU (pESCLEU )(60908-2752)
pET-3xc(pET3xc)
pET23-CBD-(-PP)-EGFP-H246,249D(pET23CBDPPEGFPH246249D)
pFA6a-3HA-His3MX6(pFA6a3HAHis3MX6)鞘氨醇桿菌屬 Sphingobacterium sp.
黑曲霉 Aspergillus niger
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
RH-35(大鼠肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
桿菌屬 Lactobacillus sp.
根瘤菌
TRX標(biāo)簽蛋白裂解液100ug20μg、100μg
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
甜菜生尾孢
枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis
HCC827(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌霍氏亞種 Lactococcus lactis subsp. Hordniae
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
SDS-PAGE Loading Buffer (非還原,5x)10ml國產(chǎn)
戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes
蘇云金芽胞桿菌蘇云金變種 Bacillus thuringeinsis subsp. thuringeinsis
彈性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
泡盛曲霉 Aspergillus awamori
pFGC5941
pGADT7-Rec (linearized)(pGADT7Rec)
pGEX-6P-2(pGEX6P2)(60908-3840)
pGL4.40[luc2P MRE Hygro]