產(chǎn)品簡介：

　內(nèi)毒素是質(zhì)粒提取中常見的污染物，由于真核細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感，因此，如果質(zhì)粒中含有內(nèi)毒素會大大降低真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。本試劑盒提供一種簡單、快捷、高效提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒的新方法，提取的質(zhì)粒最大限度去除內(nèi)毒素，并能有效去除基因組DNA、RNA、蛋白等污染。

　　本試劑盒適合提取5-15ml菌液，在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上通過新型硅基質(zhì)膜高效專一的結(jié)合質(zhì)粒DNA，每個吸附柱最高可吸附100 μg的質(zhì)粒DNA，同時采用特殊的緩沖液系統(tǒng)和除內(nèi)毒素過濾柱，有效去除內(nèi)毒素、蛋白等雜質(zhì)。由本試劑盒所得質(zhì)粒純度高、質(zhì)量穩(wěn)定，特別適用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，同時也可用于DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)化細(xì)菌，內(nèi)切酶消化等下游實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA中提試劑盒

產(chǎn)品貨號：CW2105S

產(chǎn)品組分：

額外試劑需求：無水乙醇、異丙醇。

使用注意：

1．所有組分可在干燥、室溫（15-30℃）環(huán)境穩(wěn)定保存1年，更長時間保存可置于2-8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可穩(wěn)定保存6個月。

2．第一次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時間，恢復(fù)至室溫后使用。

3．第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。

4．使用前請先檢查Buffer P2 和Buffer E3是否出現(xiàn)結(jié)晶或沉淀，如有結(jié)晶或沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。

5．注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。

6．提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質(zhì)粒大小、質(zhì)?？截悢?shù)等因素有關(guān)。

相關(guān)知識：

細(xì)菌的收獲可通過離心來進(jìn)行， 而細(xì)菌的裂解則可以采用多種方法中的任意一種， 這些方法包括用非離子型或離子型去污劑、 有機(jī)溶劑或堿進(jìn)行處理及用加熱處理等。 選擇哪一種方法取決于３個因素：質(zhì)粒的大小、小腸桿菌菌株及裂解后用于純化質(zhì)粒 DNA 的技術(shù)。

1)大質(zhì)粒 (大于 15kb) 容易受損， 故應(yīng)采用漫和裂解法從細(xì)胞中釋放出來。 將細(xì)菌懸于蔗糖等滲溶液中，然后用溶菌酶和 EDTA 進(jìn)生處理，破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞外膜，再加入 SDS 一類去污劑溶解球形體。 這種方法最大限度地減小了從具有正壓的細(xì)菌部把質(zhì)粒釋放出來所需要的作用力。

2)可用更劇烈的方法來分離小質(zhì)粒。在加入 EDTA 后，有時還在加入溶菌酶后讓細(xì)菌

暴露于去污劑， 通過煮沸或堿處理使之裂解。 這些處理可破壞堿基配對， 故可使宿主的線狀染色體 DNA 變性，但閉環(huán)質(zhì)粒 DNA 鏈由于處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)而不能彼此分開。當(dāng)條件恢復(fù)正常時，質(zhì)粒 DNA 鏈迅速得到準(zhǔn)確配置，重新形成*天然的超螺旋分子。

3)一些大腸桿菌菌株 (如 HB101 的一些變種衍生株 ) 用去污劑或加熱裂解時可釋放相對大量的糖類， 當(dāng)隨后用氯化銫－溴化乙錠梯度平衡離心進(jìn)行質(zhì)粒純化時它們會惹出麻煩。 糖類會在梯度中緊靠超螺旋質(zhì)粒 DNA 所占位置形成一致密的、模糊的區(qū)帶。因此很難避免質(zhì)粒 DNA 內(nèi)污染有糖類，而糖類可抑制多種限制酶的活性。 故從諸 如 HB101 和 TG1 等大腸桿菌蓖株中大量制備質(zhì)粒時，不宜使用煮沸法。

4)當(dāng)從表達(dá)內(nèi)切核酸酶 A 的大腸桿菌菌株 (endA+ 株，如 HB101) 中小量制備質(zhì)粒時，建議不使用煮沸法。 因?yàn)橹蠓胁荒?滅活內(nèi)切核酸酶 A，以后在溫育 (如用限制酶消化 )時，質(zhì)粒 DNA 會被降解。但如果通過一個附加步驟 (用酚：氯仿進(jìn)行抽提 )可以避免此問題。

儲存與運(yùn)輸

室溫 (15-30℃)

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA中提試劑盒

產(chǎn)品貨號：CW2105S

產(chǎn)品訂購信息  

品牌               貨號                         名稱               規(guī)格

康為世紀(jì)    CW2105S     無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒  50 preps

關(guān)于公司：

康為世紀(jì)生物科技股份有限公司是一家立足于生命科學(xué)領(lǐng)域，有自主知識產(chǎn)權(quán)的國家優(yōu)良企業(yè)，主要從事高附加值、高技術(shù)含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn)，為生命科學(xué)研究、基因檢測和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務(wù)。產(chǎn)品線主要包括分子診斷原料酶、核酸采集與保護(hù)劑、核酸提取、分子診斷檢測試劑等，打破了中國生物研究與產(chǎn)業(yè)對進(jìn)口試劑的依賴。

紅榮微再——助理分子診斷新未來

紅榮微再作為RNA、NGS、ctDNA、qPCR的分子診斷專業(yè)供應(yīng)商，以“傳遞科學(xué)價值，服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨,努力為客戶提供質(zhì)量可靠、貨美價優(yōu)的分子診斷試劑耗材，與客戶攜手為中國分子診斷的發(fā)展而前行。