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導(dǎo)讀

中國藥科大學(xué)多靶標(biāo)天然藥物全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室以我國豐富的天然藥物資源為研究對象，在活性物質(zhì)發(fā)現(xiàn)、生物功能與成藥性等研究方向有著豐碩的研究成果。為了深化多領(lǐng)域的探索并提升研究效率，實(shí)驗(yàn)室近期引入島津獨(dú)家研發(fā)的全譜二維+Q-TOF液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)（即4in1分析系統(tǒng)），該系統(tǒng)擁有多項(xiàng)授權(quán)專利技術(shù)，能夠同時(shí)對多極性目標(biāo)物進(jìn)行高效分離，在中藥復(fù)雜組分分析、天然產(chǎn)物定性定量以及代謝組學(xué)領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。去年11月底，此液質(zhì)聯(lián)用設(shè)備安裝完畢，中國藥科大學(xué)多靶標(biāo)天然藥物全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-島津合作項(xiàng)目正式啟動(dòng)，開啟天然產(chǎn)物與代謝組學(xué)合作研究新篇章。

基于合作項(xiàng)目的最新成果發(fā)布

全譜二維液相和高分辨Q-TOF質(zhì)譜儀LCMS-9050到貨安裝后，島津分析中心工程師與客戶一直保持密切合作，近日相關(guān)合作成果發(fā)表于分析化學(xué)綜合性期刊《Talanta》（中科院一區(qū)Top期刊，IF=5.6）上。該研究中，李萍教授和楊華教授團(tuán)隊(duì)使用島津全譜二維液相和高分辨質(zhì)譜LCMS-9050聯(lián)用作為4in1分析系統(tǒng)，用于動(dòng)脈粥樣硬化小鼠多種生物樣本的代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)研究。該系統(tǒng)通過特色二維液相寬極性分離+LCMS-9050的正負(fù)離子切換模式，展示了在各種生物基質(zhì)中進(jìn)行非靶代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)研究的強(qiáng)大能力，為血管疾病的進(jìn)一步探索提供了有力的技術(shù)支撐。

文章首頁

4In1分析系統(tǒng)介紹說明

研究成果鑒賞

4in1分析系統(tǒng)的構(gòu)建與評估

對于傳統(tǒng)LCMS，為了覆蓋目標(biāo)物廣泛的極性，需要分別通過HILIC和RPLC分離代謝物。此外，還需要進(jìn)樣2次才能在正和負(fù)模式下獲得更全面的MS信息。島津獨(dú)家4in1分析系統(tǒng)通過全譜二維寬極性分離 + LCMS-9050正負(fù)離子切換模式，一針進(jìn)樣可得到常規(guī)液質(zhì)分析方法進(jìn)樣4針的數(shù)據(jù)信息，減少了75%的樣品量和質(zhì)譜分析時(shí)間，顯著提高了分析通量和效率。該流路通過2D平行設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)充分平衡和清洗，減少了交叉污染和記憶效應(yīng)，提高了系統(tǒng)穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

島津全譜二維液相+LCMS-9050（4In1分析系統(tǒng)）技術(shù)特點(diǎn)

在本研究中，中國藥科大學(xué)李萍教授和楊華教授團(tuán)隊(duì)的丁夢博士分別從目標(biāo)物極性覆蓋率、質(zhì)量精度和方法重現(xiàn)性這三個(gè)方面對4in1分析系統(tǒng)進(jìn)行了全方位的評估測試：

1極性覆蓋率

全譜二維LC將親水性代謝物在HILIC柱上保留并分離，而疏水性代謝物則通過閥切換到RP柱上進(jìn)一步分離。作者比較了使用1D和全譜2D-LC方法檢測到的離子峰數(shù)量，發(fā)現(xiàn)單獨(dú)使用HILIC和RPLC方法在死時(shí)間會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重共洗脫現(xiàn)象，導(dǎo)致分析物分離不足。全譜2D相比1D-LC方法提高了代謝組和脂質(zhì)組的極性覆蓋率（圖1A），有效緩解了1D-LC死時(shí)間中出現(xiàn)的嚴(yán)重共洗脫問題。

2質(zhì)量精度

使用NaI溶液作為外標(biāo)校正質(zhì)量，24小時(shí)內(nèi)6次進(jìn)樣檢測，計(jì)算[Na-(NaI)n]+（m/z 172.8835，472.6719，922.3547）和[I-(NaI)n]-（m/z 276.7993，576.5877，1026.2705）質(zhì)量偏差以評估4in1分析系統(tǒng)的質(zhì)量精度。結(jié)果顯示：NaI外標(biāo)m/z質(zhì)量偏差均＜3 ppm（圖1B），表明該系統(tǒng)具有優(yōu)異的質(zhì)量精度。

3方法重現(xiàn)性

在整個(gè)分析批表中，作者每隔5個(gè)樣本分析1次QC樣本以評估全譜二維液質(zhì)聯(lián)用方法重現(xiàn)性。24h連續(xù)分析下，正和負(fù)模式6次QC樣本TIC色譜圖幾乎重疊（圖1C），且具有良好的峰形和分離度。PCA多元統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：QC平行樣本聚集度高（圖2A），表明儀器狀態(tài)穩(wěn)定，測定過程中未出現(xiàn)明顯偏差。

圖1. 4in1分析系統(tǒng)的方法評價(jià)測試

基于4in1分析系統(tǒng)的動(dòng)脈粥樣硬化小鼠非靶代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)分析

丁夢博士利用4in1分析系統(tǒng)對模型組與對照組小鼠血漿和主動(dòng)脈組織樣本，進(jìn)行非靶代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)分析。PCA結(jié)果顯示：模型組與對照組在血漿和主動(dòng)脈組織樣本中均能完全分開，表明動(dòng)脈粥樣硬化小鼠與對照組小鼠在血漿和主動(dòng)脈組織中均發(fā)生了顯著的代謝變化。從對OPLS-DA模型有較大貢獻(xiàn)的特征峰（VIP>1）中篩選潛在差異物，結(jié)合倍數(shù)變化（FC>2）及T檢驗(yàn)（P<0.05）生成火山圖 (圖2C)。以血漿樣本為例，檢測到230個(gè)差異代謝物及脂質(zhì)，包括113個(gè)甘油磷脂、62個(gè)鞘脂、19個(gè)脂肪?；?、11個(gè)甘油酯、5個(gè)甾醇及其衍生物、3個(gè)前醇脂質(zhì)、3個(gè)羧酸及其衍生物、3個(gè)嘧啶核苷、3個(gè)有機(jī)氧化合物、2個(gè)羥酸及其衍生物等（圖2D）。

丁夢博士使用全譜二維液質(zhì)聯(lián)用儀分析現(xiàn)場

圖2. 動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的非靶代謝組與脂質(zhì)組分析（血漿）

非靶代謝組結(jié)果顯示了動(dòng)脈粥樣硬化小鼠中脂肪酸（包括肉豆蔻酸、二十二碳三烯酸等）、嘧啶核苷（如脫氧尿苷、尿苷等）和多種亞油酸（如亞麻酸、亞油酸等）的顯著變化（圖3）。顯示動(dòng)脈粥樣硬化可能伴隨著脂肪酸生物合成、嘧啶代謝和亞油酸代謝異常等代謝通路的變化（圖4）。

脂質(zhì)組結(jié)果顯示，在不同的生物樣本（小鼠血漿及主動(dòng)脈組織）中發(fā)現(xiàn)了大量不同且互補(bǔ)的脂質(zhì)特征，它們與動(dòng)脈粥樣硬化疾病相關(guān)，包括甘油磷脂類（GP）、鞘脂類（SP）、甘油酯類（GL）、固醇類（ST）等，對不同脂質(zhì)亞類在動(dòng)脈粥樣硬化小鼠中的變化做了進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)磷脂酰膽堿（PC）成為數(shù)量最多的差異脂質(zhì)（圖3）。KEGG代謝通路分析表明動(dòng)脈粥樣硬化小鼠中發(fā)生了顯著的脂質(zhì)代謝紊亂，包括甘油磷脂代謝，鞘脂代謝，膽堿代謝，膽固醇代謝等（圖4）。

圖3. 動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的主要代謝變化

(AC) 血漿樣本；(BD) 主動(dòng)脈組織樣本

圖4. 動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的代謝通路富集分析

(A) 血漿樣本；(B) 主動(dòng)脈組織樣本

結(jié)語

全譜二維液質(zhì)系統(tǒng)是島津獨(dú)家產(chǎn)品，極性分流（發(fā)明專利號(hào)ZL202010477040.0）、在線稀釋（發(fā)明專利號(hào)ZL201410187543.9），雙重梯度（發(fā)明專利號(hào)ZL202110407632.X），適合于極性相差較大的多類物質(zhì)的同時(shí)分析，特別是代謝組學(xué)的全組分分析。借助全譜二維的4in1分析系統(tǒng)，中國藥科大學(xué)李萍教授和楊華教授團(tuán)隊(duì)在動(dòng)脈粥樣硬化小鼠血漿和主動(dòng)脈組織中分別發(fā)現(xiàn)了230和170種代謝物變化，揭示了涉及不飽和脂肪酸生物合成、鞘脂代謝、膽固醇代謝、甘油磷脂代謝和膽堿代謝等動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)代謝途徑。這些結(jié)果表明，4in1分析系統(tǒng)是復(fù)雜生物基質(zhì)中非靶代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)研究的強(qiáng)大工具。最后也期待島津全譜二維液質(zhì)系統(tǒng)能夠賦能科研者們，幫助他們實(shí)現(xiàn)更多的成果產(chǎn)出！

撰稿人：陳夢宣

參考文獻(xiàn)

Meng Ding, Luwei Zheng, Xiaolin Hua, Mengxuan Chen, Qisheng Zhong, Taohong Huang, Ping Li, Hua Yang. Simultaneous metabolomics and lipidomics analysis based on 4in1 online analysis system reveal metabolic signatures in atherosclerotic mice. Talanta, Volume 283, 2025, 127109.