Hygromycin B 潮霉素B（抗生素）

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品屬性：

別名 : 濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉
英文名稱 : Hygromycin B
CAS : 31282-04-9
儲(chǔ)存條件 : -20℃

Hygromycin B 潮霉素B（抗生素）生物應(yīng)用： 

1）   篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph+載體的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞（植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞）； 

2）   由于作用模式的差異，常與G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和blasticidin S聯(lián)合使用，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個(gè)不同載體的細(xì)胞株；

3）抗病毒劑，由于潮霉素B選擇性滲透進(jìn)入病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，而且具有抑制翻譯的功效；

4）作為驅(qū)蟲藥加入動(dòng)物飼料； 

應(yīng)用濃度： 

潮霉素B用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL，濃度需要?dú)缜€來(lái)確定。 

哺乳動(dòng)物細(xì)胞·200-500 μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞·100-300 μg/mL；真菌·300-1000μg/mL； 

產(chǎn)品使用：

使用一：殺滅曲線確定殺死濃度（僅作參考，因個(gè)人檢測(cè)體系而異）

（1）往組織培養(yǎng)級(jí)的96孔板內(nèi)加入未轉(zhuǎn)染細(xì)胞，細(xì)胞密度約50-200細(xì)胞/孔；細(xì)胞貼壁之后，往每孔加入含不同濃度（如50-1000μg/mL，至少5個(gè)濃度）潮霉素B的200μL新鮮培養(yǎng)基；

（2）37℃，5% CO2培養(yǎng)箱孵育細(xì)胞10-14天；

（3）培養(yǎng)5-7天后更換新的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液內(nèi)含有相應(yīng)濃度的潮霉素B；

（4）10-14天后使用細(xì)胞增殖方法如MTT，CCK-8等評(píng)估細(xì)胞活力；也可以通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞克隆數(shù)或百分比匯合率來(lái)確定毒性效應(yīng)。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細(xì)胞的zui小濃度為篩選濃度。

使用二：篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞

（1）對(duì)于貼壁細(xì)胞，直接吸去60mm培養(yǎng)皿內(nèi)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)基，然后加入含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基5-6ml；對(duì)于懸浮細(xì)胞，無(wú)菌條件250x g,離心10min除去舊的轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)基，然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基；

（2）5-7天后，如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基；

（3）再孵育細(xì)胞5-7天；

（4）10-14天孵育后，培養(yǎng)體系中只含有能夠表達(dá)潮霉素B抗性表型的活細(xì)胞。因此篩選之后如步驟一，更換不含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基。