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419次常用免疫試劑的配制方法
1.抗體或免疫球蛋白稀釋液0.01mol/L pH7.2PBS
NaH2PO4.2H2O 0.39克
Na2HPO4 1.27克
NaCl 0.85克
NaN3 200mg
H2O (蒸餾水) 至 1000ml
2.DAB溶液配制:(組化及Western blot 顯色)
稱DAB30mg,用0.05mol/L pH7.6Trs-HCl緩沖液100ml溶解,如有沉淀,過(guò)濾后使用,一般新鮮配制使用。
用前加入1%H2O2 1~1.5ml,H202濃度為0.01%,混勻后使用。
3.3,3,5,5,—四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液配制:
用二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)或無(wú)水乙醇,將TMB配成1%濃度,4 ℃ 保存半年以內(nèi)使用。
使用前,用pH5.0磷酸—檸檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mgTMB)1%TMB液,再按每毫升TMB加入1μl30% H2O2混勻后立即使用。
2N H2SO4終止后,450nm測(cè)定OD值。
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