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人E選擇素（E-Selectin/CD62E）ELISA試劑盒

Human E-Selectin ELISA kit

包裝：96T/48T
檢測(cè)標(biāo)本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
保存：2-8℃，一年。

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人E選擇素（E-Selectin/CD62E）ELISA試劑盒 供應(yīng)商：

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相關(guān)知識(shí)>>>>>>>
試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 pg/ml （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 pg/ml （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 pg/ml （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 pg/ml （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml （空白對(duì)照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí)，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀 釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬(wàn) /ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻 漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
液體類標(biāo)本：
標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝ 100ul × 檢測(cè)種類。取材前須向銷售人員索要說(shuō)明書。
血清：
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí)，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀 釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬(wàn) /ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻 漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
操作注意事項(xiàng)
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9． 按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。